发酵工业菌种应用.ppt

本章内容 §1 菌种筛选 一、常用的工业微生物 二、发酵工业菌种分离筛选 一、常用的工业微生物 p13 1、细菌 醋杆菌属的醋化醋杆菌、弱氧化醋杆菌 乳酸杆菌 枯草杆菌 一、常用的工业微生物 2、酵母菌 酿酒酵母 假丝酵母属 产朊假丝酵母 解脂假丝酵母 热带假丝酵母 毕赤酵母属、汉逊酵母属 一、常用的工业微生物 3、霉菌 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 一、常用的工业微生物 4、放线菌 链霉菌属 小单孢菌属 地中海诺卡氏菌 5、未培养微生物p14 ※定义：指迄今所采用的微生物纯培养分离及培养方法还未获得纯培养的微生物。 其在自然环境微生物群落中占有非常高的比例，约为99％。 二、发酵工业菌种分离筛选P15 菌株分离：将混杂着各种微生物的样品按照实际需要和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程。 ※（一）、 菌种选择的要求p15 培养基原料来源广、产物易回收 发酵周期较短； 条件易控制； 抗病毒（噬菌体）、杂菌能力强； 菌种不易变异退化； 对放大设备的适应性强； 菌种不是病原菌 1、样品的采集p15 样品来源越广泛，获得新菌种的可能性越大。 ※采样时应注意的问题: 　A、土壤的有机质含量和通风状况 　B、土壤的酸碱度和植被状况 　C 、地理条件 　D 、季节条件 上节知识回顾 一、常用的工业微生物 二、发酵工业菌种分离筛选 1、样品的采集 A、土壤的有机质含量和通风状况 　B、土壤的酸碱度和植被状况 　C 、地理条件 　D 、季节条件 采土样的方法 南方：用取样铲，将表层5cm（阳光直射，蒸发量大水分少，而且受紫外线照射）左右的浮土除去，取5～25cm处的土样10～25g，装入事先准备好的塑料袋内扎好。 北方：土壤干燥，可在10～30cm处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。 一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。 一、诱变育种 二、航天育种 自然选育是一种简单易行的方法，可达到纯化菌种、防止菌种退化、稳定生产、提高产量的目的。但其突变率很低，因而要采用新方法进行菌株的改良。 改良的方法 常规育种(诱变育种) 细胞工程育种 基于代谢调节的育种技术 基因工程育种 蛋白质工程育种 代谢工程育种 一、诱变育种 诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质 作业 1、工业上对菌种选择有何要求？ 2、诱变育种应注意哪些问题？ A 分区划线法 B 连续划线法 将样品分散到最低浓度 倒平板，培养，挑取单菌落 后面3个稀释度各取0.1 ml涂布 透明圈法 变色圈法 抑菌圈法 生长圈法 （2）、生化反应分离法： 在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培养基混浊，这样能分解该底物的微生物便会在菌落周围产生透明圈。 圈的大小可初步反映该菌株利用底物的能力，完全可以作为菌种初筛的判断标准。如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶及核酸酶产生菌的分离，产有机酸菌的初筛。 透明圈法 例1：分离某种产生有机酸的菌株时，在培养基中添加碳酸钙。 例2：分离淀粉酶产生菌时，培养基以淀粉为唯一碳 源，待样品涂布到平板上，经过培养形成单个菌落 后，再用碘液浸涂，根据菌落周围是否出现透明的水 解圈来区别产酶菌株。 对于一些不易产生透明圈产物的产生菌，可在底物平板中加入指示剂或显色剂，使所需微生物能被快速鉴别出来。 变色圈法 例1：分离果胶酶产生菌，用含0.2%果胶为唯一碳源，菌落长成后加入0.2%的刚果红溶液染色4h，具有分解果胶能力的菌落周围便会出现降红色的变色圈。 例2：分离内肽酶产生菌，除了用酪蛋白作底物平板产生透明圈进行鉴别外，还可用吲羟乙酸酯为底物加到分离培养基内，产生蛋白酶的菌落由于水解吲羟乙酸酯为3-羟基吲哚，后者能氧化生成蓝色产物，根据变色圈便可选出平板上产蛋白酶菌株。 若被检菌能分泌某些抑制工具菌生长的物质，如抗生素等，便会在该菌落的周围形成工具菌不能生长的抑菌圈，被鉴别出来。 抑菌圈法： 常用于抗生素产生菌的分离。工具菌的选择是关键，工具菌采用抗生素的敏感菌。 传统上常用金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作为工具菌检验抗生素的抗性，现采用联合工具菌如枯草芽孢杆菌和绿色产色链霉菌或巴氏梭状芽孢杆菌，可分离出抗菌活性低，对其它试验菌活性高的新抗生素，如黄色霉素族的抗生素，而这些抗生素在单独使用枯草芽孢杆菌作工具菌时无法检出。 抑菌圈自动测量分析仪 如，嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤的琼脂混合倒平板，在其上涂布含菌样品进行保温培养，周围出现生长圈的菌落即为