微生物和免疫学试验(六)七年制.ppt

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微生物与免疫学试验(六) 要求 讲解:肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌 示教片:肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌 示教平板:SS平板(肠道致病均和非致病均各一个)、双糖铁培养基(大肠、痢疾、伤寒、变形)、炭疽卷发样菌落; 其它示教:小生化反应(大肠、痢疾、伤寒、变形) 操作:肥达反应(注意标签贴试管上,不要贴到架子上) 录像:肠道杆菌 操作:肥达反应(试管凝集反应) 器材:试管6支/人,试管架1个/2人, 吸管1支/人,标签1个/人 已知: 伤寒H抗原、O抗原 (4人/组) 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原 待检:病人血清(1:10稀释) 倍比稀释法 1 2 3 4 5 6 生理盐水 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清 0.5(吹打) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5(弃) 菌液 0.5ml/管 ,从第6 1管加,振匀 水浴43度,2h 最终血清 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 对照 稀释度 凝集强弱 效价 *吸管 桶,试管 锅, 标签贴在试管上。 结果判断 以出现 凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价 O 达到1:80,H达到1:160 H甲(PA)或H乙(PB)达到1:80或以上有诊断意义 结合当地流行病学史、病程和抗体消长的意义进行判断。 肠道杆菌的鉴定 SS培养基 双糖铁培养基 生化反应表 炭疽杆菌 致病菌中最大的G+粗大杆菌 ,两端平切、排列呈竹节状;有荚膜,芽胞在有氧条件下形成,呈椭圆形,位于菌体中央 厌氧菌 庖肉培养基 成分   牛肉浸液       1000mL   蛋白胨        30g   酵母膏        5g   磷酸二氢钠      5g   葡萄糖        3g   可溶性淀粉      2g   碎肉渣适量   pH7.8 制法   1 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g,加蒸馏水1000mL和1mol/L氢氧化钠溶液25mL,搅拌煮沸15min,充分冷却,除去表层脂肪,澄清,过滤,加水补足至1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分,校正pH。   2 碎肉渣经水洗后晾至半干,分装15mm×150mm试管约2~3cm高,每管加入还原铁粉0.1~0.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm。上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0.3~0.4cm。121℃高压灭菌15min。 * 第6管 均匀混浊 + 少量凝集 ++ 细菌部分沉于管底,液体半澄清,凝集 呈颗粒状 +++ 大部分凝集,液体轻度混浊,凝集块较大 ++++ 全部凝集,液体澄清,大片凝集块 O、H 正常值 感染可能性大 O、H 低 感染可能性小 O 不高 H 高 预防接种或非特异性回忆反应 O 高 H 不高 感染早期或交叉反应 类别 凝集效价 意义 大肠杆菌 伤寒杆菌 变形杆菌 痢疾杆菌 胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红 抑制杂菌生长 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸:红 碱:黄 Shigella-Salmonella medium 菌落红色——乳糖发酵阳性,非致病菌 菌落无色——乳糖发酵阴

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