香菇菌丝原生质体制备与融合条件的研究.pdf

年 月 安徽大学学报 （自然科学版） 2001 9 September 2001 第 卷 第 期 25 3 JOurnaI Of Anhui University NaturaI Science EditiOn VOI .25 NO . 3 香菇菌丝原生质体制备及融合条件的研究 李 蕤，马守能，刘 群，吴 克，刘 斌，潘仁瑞 （合肥联合大学 化学与生物工程系，安徽 合肥 230022 ） 摘 要：讨论不同菌龄、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂对香菇原生质体产率的影响。结果表明， 香菇菌丝制备原生质体时最适菌龄为 天，酶解时间为 ，酶解温度为 ，渗透压稳定剂用 甘 6 3h 34 C 0 . 6mOI/ L 露醇为最佳。在此基础上，以 的 为融合诱导剂进行香菇 、 种间原生质体融合，并用显微镜 35 % PEG B01 L26 观察到融合子的形成。 关键词：香菇；原生质体；融合 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） S646 A 1000 - 2162 2001 03 - 0099 - 05 ! 引 言 目前我国香菇占有50 % 以上的国际市场，具有巨大的经济价值，因此，通过育种方法提 高香菇产量和质量是必要的。近30 年来，我国进行香菇育种的主要途径是自然选育和杂交 育种。细胞融合（即原生质体融合）尚在试验探讨阶段，并被证明是一种行之有效的育种新 ［ ］ 方法 1 - 3 。优良原生质体制备条件的选择是开展以原生质体为材料育种工作的基础。本试 验对香菇原生质体制备、融合的影响条件进行了研究，为香菇原生质体融合育种提供了试验 依据。 实验方法 . 材 料 供试菌种 香菇 菌株、香菇 菌株，均由安徽合肥九 一食用菌厂提供。 1. 1. 1 B01 L26 0 ［、］ 培养基4 5 母种培养基 ：马铃薯 ；葡萄糖 ；琼脂 ；水 1. 1.2 PDA 200g 20g 20g 1000mL 液体扩大培养基 ： 去掉琼脂 PD PDA ［］ .# 溶液的配制6 稳定剂 甘露醇渗透压稳定剂； 蔗糖渗透压稳定剂； 1.2 . 1 0 . 6mOI/ L 0 . 6mOI/ L 0 . 6mOI/ L MgSO 渗透压稳定剂。 4 缓冲液 的柠檬酸溶液； 的 溶液； 为 的柠檬 1.2 .2 0 . 1mOI/ L 0 . 2mOI/ L Na HPO pH 5 . 6 2 4 酸- Na HPO 缓冲液。 2 4 酶制剂的配制 溶壁酶（ ）（由广东微生物研究所生产）：用 的上 1.2 . 3 LywaIIzyme