海参皂苷消化吸收特性探究.ppt

海参皂苷的消化吸收特性的研究 负 责 人：宋姗姗 组 员：王梦飞、朱诗怡、于鹏凯 所在院系：食品科学与工程学院 专业年级：食品科学与工程10级 指导教师：王玉明 实验时间：2012年4月至2013年4月 实验目的 研究海参皂苷的消化吸收特性，为深入研究海参皂苷的药理活性机制及新型相关功能性保健食品研发提供支持。 通过该实验，熟悉了解一些基本的实验技能和实验仪器的使用。 实验支撑条件 本实验以食品科学与工程学院——人类健康实验室为依托，该实验室近年在海参加工和活性物质研究方面具有丰富的经验和雄厚的前期基础。 人类健康实验室具备本实验所需以下仪器：动物实验设备（饲养室、钢丝笼），高效液相色谱-质谱（HPLC-MS/MS），基本的生化学试剂和有机溶剂。 王玉明教授对海参的营养与活性、海参营养保持技术有深入的研究，具有较强的科研教学经验。 实验内容 1、海参粗皂苷的提取根据海参皂苷的化学性质，利用乙醇浸提法提取海参干粉中总皂苷，并进一步经过水饱和正丁醇萃取和大孔树脂纯化后得到总海参皂苷。 2、海参皂苷溶液的配制 将1800mg海参总皂苷溶解于36ml生理盐水中，配成溶液，备用。 实验内容 3、动物实验 3.1高剂量皂苷单体EA灌胃大鼠实验 实验内容 3、动物实验 3.2低剂量皂苷单体EA灌胃大鼠实验 实验内容 4、血清皂苷单体EA液质检测方法的确定 4.1血清样本的前处理（反相C18固相萃取柱萃取法） 实验内容 4.1血清样本的前处理（反相C18固相萃取柱萃取法） 实验内容 4.2实验确定皂苷单体HPLC-MS/MS检测分析条件 液相色谱条件：Zorbax SB-C18色谱柱（4.6mm×250mm, 5μm）； 流速：1.0mL/min；进样量：20μl；柱温：30℃； 流动相：A：乙腈，B：0.1 %磷酸水溶液； 梯度模式：时间梯度：0→5→30→35min 浓度梯度：30%→30%→50%→30% 溶剂A 质谱条件：电喷雾离子化，负离子模式检测；进入质谱流动相分流至0.5mL/min；细管电压3. 0 kV；锥孔电压35 V；离子源温度80℃；干燥气温度150℃；质量扫描范围m/ z 200～2000；雾化气（N2）流速15 L/h；干燥气（N2）流速11.0 L/h； EA单体MRM模式检测m/z=591.4。 实验结果 1、高剂量皂苷单体EA消化吸收曲线 实验初步确定高剂量及低剂量皂苷单体EA的消化吸收曲线，如下： 实验结果 2、低剂量皂苷单体EA消化吸收曲线 实验结果 3、血清皂苷单体EA的液质分析方法回收率检验 取空白血清，加入一定浓度的标准品，使血清中EA的浓度分别为0.6μg/mL、10μg/mL、20μg/mL，用测定样品的方法对标准品进行检测，测定方法回收率为89.4%，95.7%，92.4%，证明该分析方法准确性良好。 * * 实验组 7组*5只 对照组 4组*3只 对照组 4组*3只 每只注射1ml皂苷溶液，剂量为50mg/只 每只注射1ml生理盐水 0、2、4、6、8、11h时对实验 组的一组大鼠主动脉取全血处死 0、2、8、11h对对照组的 一只大鼠主动脉取全血处死 另外，将实验各组大鼠消化道完整分离，收集消化道内容物， 将8、11h实验组及对照组的大鼠放入代谢笼，收集其粪便和尿液。 实验组 7组*3只 每只注射1ml皂苷溶液，剂量为15mg/只 0、0.5、1、2、3、4、7、9、11、24h 时对实验组的一组大鼠主动脉取全血处死 另外，将实验各组大鼠消化道完整分离， 收集消化道内容物，将8、12、24h实验组及对 照组的大鼠放入代谢笼，收集其粪便和尿液。 240μl血清 加入360μl无水乙醇 加入超纯水 10ml甲醇和10ml水活化固相萃取柱 将样品经固 相萃取小柱 将乙醇浓度 稀释到10% 1200r离心5min 5ml水洗脱 上清液 混匀 100μL色谱纯甲 醇溶解提取物 40℃旋蒸至干 收集甲醇洗脱液 10ml甲醇洗脱 进样HPLC-MS/MS检测分析 *