实验四 鸡新城疫的实验室诊断与免疫效果的评价.ppt

鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价 目的 1、掌握鸡新城疫的临诊要点。 2、了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术。 内容： 1、鸡新城疫的临诊要点。 2、鸡新城疫的实验室诊断。 3、鸡新城疫的免疫效果评价。 血凝试验（HA）和血凝抑制试验 (HI) HA和HI的原理 ⒈HA试验：许多病毒表面有血凝素，能与各种动物的红细胞表面受体结合，而出现红细胞凝集现象，简称为病毒的血凝现象?。 2.HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制，称HI试验。 一、鸡新城疫的血凝试验(HA) 【材料】 新城疫病毒鸡胚接种尿囊液 1份 0.5％鸡红细胞悬液 1管 生理盐水或PBS 1瓶 96孔微量血凝板 1块 微量加样器 1支 【病毒血凝试验的操作方法（单位：?L）】? 【 结果判定 】 置于振荡器上振荡1分钟，静置后30 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。? 二、鸡新城疫的血凝抑制试验(HI) 【材料】 除血球凝集试验所用材料外，血清取鸡免疫血清或者取高免卵黄抗体。 【病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：?L） 】 【结果判定】 以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者，该病毒为新城疫病毒。 从表4-2看出，该血清的HI效价为1:64，用以2为底的负对数(-log2)表示，即6log2。 作业 1、免疫鸡群发生新城疫流行有何特点？ 2、简述确证新城疫的实验室诊断。 3、记录并分析HA、HI实验的结果。 4、进行HA、HI实验时有哪些注意事项？ * - - + + +++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ 结果观察 微型振荡器1min，静置30min 弃50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 0.5%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病毒液 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 生理 盐水 对照 1:2048 1:1024 1:512 1:256 1:128 1:64 1:32 1:16 1:8 1:4 1:2 病毒稀释度 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 孔 号 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位 弃50 以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。 *