镇痛药理探究20101211.ppt

④ 由于4℃是一种非伤害性刺激，很少引起正常大鼠的抬足反应，因此该方法一般不以正常动物作为研究镇痛药物的受试动物。 此外，一些神经病理性痛动物模型，如坐骨神经部分结扎模型等，往往不表现冷诱发的痛觉超敏现象，所以在利用这些模型研究镇痛药物的作用时也不宜采用此方法。 丙酮诱发的痛觉超敏 【原理】利用丙酮挥发过程吸收热量引起的冷刺激，诱发动物出现以缩足反应为主要表现的疼痛反应，给药后缩足反应次数或潜伏期的变化可直接反映受试药物镇痛作用强弱。 方法 1．L5/L6脊神经结扎模型大鼠的建立：依据Kim和Chung报道的方法。 2．实验分组：将制备好的L5/L6脊神经结扎痛模型大鼠随机分为盐水对照组，2.5 mg/kg吗啡注射组，5.0 mg/kg吗啡注射组和10 mg/kg吗啡注射组。 3．模型大鼠疼痛行为学测定：将模型大鼠放在金属网架上，并罩在一个有机玻璃方盒内，适应20分钟后，利用连接有聚乙烯细管的注射器向模型大鼠脚跟滴一滴丙酮溶液（约20微升），观察模型大鼠是否出现缩足反应。连续测量五次（时间间隔为2分钟），如果模型大鼠出现缩足反应的次数超过三次，则认为该动物出现了明显的冷诱发的痛觉超敏，以缩足反应的次数作为基础阈值。然后将吗啡一次皮下注射给药后30分钟开始测痛，每30分钟测痛一次，观察4小时。 【评价】 本方法采用丙酮诱发的缩足反应测痛，反应指标明确，可直观记录，为常用测痛方法之一，广泛用于研究各种镇痛药物的效价强度和作用时程，以及药物对炎性痛、癌性痛和神经病理性痛的镇痛作用研究。 由于该方法每个时间点一般需多次重复测量，操作起来相对较复杂。 此外，该方法也可通过记录动物出现缩足反应的潜伏期作为痛觉超敏指标，测定5次取其平均值。 【注意事项】 ① 实验应在室温(20±1)℃、恒湿、安静的隔音实验室进行。 ② 每次实验在8:00-18:00进行，且最好保持在每天的同一时间段进行。 ③ 向动物脚掌滴加丙酮时注意不能触到动物脚掌，以免人为引起缩足反应。 ④ 如果同时进行双侧脚掌的痛阈测定，应首先测定损伤对侧脚掌。 冷诱发的甩尾反射 【原理】利用冷水浸尾诱发动物出现以甩尾反射为主要表现的疼痛反应，给药后痛阈的变化可直接反映受试药物镇痛作用强弱。 模型大鼠疼痛行为学测定 首先将各组模型大鼠尾巴浸入0℃冰水中（5 cm），记录大鼠出现甩尾反射的潜伏期，重复测定3次（时间间隔为15秒钟），取其平均值作为基础痛阈。 将药物一次鞘内注射给药后55分钟测定其甩尾反射的潜伏期。 【评价】 本方法采用0℃冰水诱发的甩尾反射进行测痛，操作简便，无须特殊设备，反应指标明确，结果重现性好，为常用测痛方法之一，广泛用于针刺镇痛以及阿片类镇痛药物的效价强度和作用时程研究。 【注意事项】 ① 实验必须在恒温(22～26℃)、恒湿、安静的隔音实验室进行。 ② 每次实验在8:00-18:00进行，且最好保持在每天的同一时间段进行。 ③ 实验前3天开始对测试动物进行冷水浸尾刺激，每天1次，使动物适应测试环境。 ④ 动物固定最好采用特制动物固定器，这样可以保证每次测试过程动物的固定强度一致，减少因手抓力量不同所导致的结果差异。 ⑤ 每次实验最少重复三次，取其平均值。 电刺激小鼠甩尾法 【原理】 应用恒定的电压或电流参数经皮肤或电极刺激鼠尾出现疼痛反应, 是由于兴奋C纤维产生传入放电引起的疼痛反应。 以小鼠受刺激后出现甩尾、嘶叫作为痛反应指标,记录其电压或电流参数作为疼痛阈值,根据给药前后痛阈的变化评价药物效应。 分别将小鼠放入小鼠固定器中，每次刺激前均用75％酒精擦洗鼠尾后，再用生理盐水棉球涂擦小鼠尾根刺激区以增加皮肤导电性。实验时将刺激电极(BL一410生物机能实验系统)放置于小鼠的尾根部，进行刺激：以程控方式输出电刺激，刺激电压根据预实验从20 V起，间隔2 s以步幅 1 v递增刺激电压强度，至小鼠开始出现挣扎、甩尾或抖尾、撕叫等痛反应，此时的电压值为该鼠的痛阈值。 先记录给药前小鼠出现痛反应的电压作为基础痛阈，随后各组小鼠分别灌胃给药1小时h后，将小鼠放入小鼠同定器中，按同法记录小鼠出现痛反应的刺激阈值电压,电刺激电压为35V为限，电压超过35V者均记为35V。按下式计算痛阈提高百分率。 药后痛阈均值 - 药前痛阈均值 痛阈提高百分率(%) =------------------------------ × 100 % 药前痛阈均值 芎附正天软胶囊对电刺激小鼠痛反应的电压阈值的影响(?x±s ,n = 10) 组别 剂量(g/kg 给药前