2012年湖南省部分规模化猪场蓝耳病免疫抗体检测与防控措施.doc

2012年湖南省部分规模化猪场蓝耳病免疫抗体检测流行病学调查及防控措施 周望平 王慧 邱美珍 杨俊 （湖南省生猪产业技术体系、湖南省畜牧兽医研究所 长沙 410131） 摘要：于2012年1月-12月，对湖南部分地区的9个规模猪场进行了血清流行流行病学调查，采用ELISA和PCR对猪蓝耳进行抗体检测和病源检测。结果显示：经产母猪群的猪蓝耳抗体阳性率在89%以上，平均阳性率为94%，S/P值＞2.5的比例占17%；后备母猪群的猪蓝耳抗体阳性率在63%以上，平均阳性率为92%，S/P值＞2.5的比例占18%；公猪群的猪蓝耳抗体阳性率在88%以上，平均阳性率为93%，S/P值＞2.5的比例占17%；仔猪群的猪蓝耳抗体阳性率在67%以上，平均阳性率为76%，S/P值＞2.5的比例占15%；保育猪（30-70日龄）猪瘟抗体阳性率在38%以上，平均阳性率为70%，S/P值＞2.5的比例占15%。另外，在高致病性蓝耳病抗原检测中，共检出16份阳性样品，检出率为26%。数据表明：我省规模猪场的猪蓝耳抗体水平阳性率较高，但S/P值＞2.5的的猪只所占比例大，抗原检出率高，病野毒感染普遍存在。应做好蓝耳防控措施。 关键词：猪蓝耳病， 抗体，水平 ELISA，抗原，PCR, 流行病血清学调查 蓝耳病全称猪繁殖与呼吸系统综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS,),是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒引起的急性高致死性传染病，主要引起妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状[1-2]。1987年首次在美国报道该病[3]，1990 年冬传入欧洲并迅速在欧洲各国暴发和流行，目前PRRS已在全世界范围内流行[4]。我国于1996年首次分离到猪繁殖与呼吸系统综合征病毒[5]，而后在我国部分省市出现了暴发流行。2006年夏季, 我国南方地区发生以体温升高、皮肤发红和呼吸急促为主要临床特征的“猪高热综合征”,很快波及全国大部分养猪地区[6-7]。2007年4月,Tian K等[8]初步确定此次疫病主要病原为高致病性PRRSV变异株。 近年来，虽然没有蓝耳病的大爆发流行，但仍是猪病防控的一大难题，已被政府列为强制免疫的疾病之一。本文通过调查湖南省部分地区规模猪场PRRS的血清抗体水平和病原情况，以期了解PRRS的流行病学情况野毒感染情况和免疫抗体水平，。为规模化猪场猪PRRS防控提供数据参考。 材料 1.1　样品采集时间 2012年1月-2012年12月。 1.2　血清、和组织样品的采集地点和样本数 从湖南岳阳、郴州、益阳、常德等地区的9个规模猪场共采集2361份血清样品，其中经产母猪血样1048份，后备母猪429份，公猪294份，仔猪288份，保育猪302份。组织样品62份。具体情况见表1。 表1 血清样品采集登记表 猪场编号 采样数 经产母猪 后备母猪 公猪 仔猪 保育猪 1 213 56 29 21 35 2 83 63 22 77 51 3 67 48 118 - 20 4 149 69 14 18 18 5 92 42 13 - - 6 85 48 28 83 74 7 108 33 15 33 40 8 101 30 20 13 32 9 150 40 35 43 32 合计 1048 429 294 288 302 1.3血清样品采集和处理 血清样品利用真空采血管于猪耳静脉（大猪）和前腔静脉（小猪）无菌采血1-2mL，于4℃下过夜，次日以4000转/分钟，离心15分钟，收集上清于1.5mL管中，-20℃保存备用。组织样品剖检猪后采集心肝脾肺肾淋巴结，组织匀浆后用于病毒RNA提取。 1.4试剂与仪器 猪蓝耳抗体检测试剂盒(PRRSV-X3)（购自IDEXX公司）；德国Eppendorf移液器；美国宝特公司ExL800酶标仪。反转录试剂盒（RevertAidTM first Strand cDNA Synthesis Kit）购自Fermentas公司。 1.5 免疫情况 各规模猪场猪瘟疫苗和免疫程序都相同。疫苗用的是高致病性蓝耳（JiangXi-1R株）弱毒苗，免疫种猪群按每年3，6，9，12各普疫一次，仔猪在出生后15-21天首免。 1.65 引物 根据高致病性蓝耳病病毒编码Nsp2蛋白的基因序列，设计一对引物，引物的扩增片段包括其基因整个缺失区。扩增片段的理论长度在480 bp左右。 2 方法： 2.1 猪蓝耳病抗体检测及判定标准 S/P=(样品OD值-标准阴性对照OD值)/(标准阳性对照OD值-标准阴性对照OD值) 蓝耳抗体ELISA试验成立条件：标准阳性OD值≧0.4，标准阴性OD值0.2。判断标准：阳性值为S/P≥0.4；阴性值为S/P＜0.4。） 2.2