人肝细胞型体外生物人工肝支持系统的实验研究.docVIP

军医进修学院;解放军总医院 博士学位论文 人肝细胞型体外生物人工肝支持系统的实验研究 姓名：刘鸿凌 申请学位级别：博士 专业：内科学（传染病） 指导教师：辛绍杰;貌盼勇军医进修学院博士学位论文 提高生物人工肝的疗效。 能促进肝细胞增殖和肝脏再生．抑制?细胞活性，对受损的肝细胞具有很强的保护 胞有所增强。培养??螅?蜗赴?锨逡褐蠥?可升高至??? 速增殖，基本符合生物人工肝细胞材料的要求。 以上、总量???个肝细胞。用管路连接蠕动泵、肝细胞培养液等，构建生物反应器体 为??? ???????疞??．???椎鞍住??、血糖等变化无显著性差异。离线生 ??????／???? ???????疞 ???? ?????? ??? ? ? ?????甀?? ??? ?? ??? ????瓸? ???? ???? ??? ?：? ???? ?????????? ??????? ? ??? ? ?? ??? ? ??????琲??? ??????瓵?? ? ???????，? ?? ???? ?? ? ?瓵?? ????? ? ? ? ? ???? ?????????． ??? ?? ????? ? ?? ?? ???? ???瑃? ??? ?? ??????? ?? ??? ??? ????? ? ? ? ??? ???甌? ?? ?? ??????????疞 ??? ????? ??? ? ??，? ?????琣? 军医进修学院博士学位论文 ? ???? ??? ???琺???? ????? ??? ? ??????? ??? ????? ???琣? ? ???? ??????； 中文全称 ?????? 生物人工肝支持系统 牛血清白蛋白 细胞角蛋白? ??培养液 二硫苏糖醇 ??? ??? ??? ? ????? ??? ? 军医进修学院 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 军医进修学院博士学位论文 ?????应用中容易大量获取的细胞材 ???，????锶斯じ卧谖夜??械腎?期临床研究取得 较好的结果。治疗组?例，治愈好转?例?????， 军医进修学院博士学位论文 ??????，??是一种热稳定、可促肝细 胞增殖、再生的细胞因子，有着肯定的促进肝细胞生长作用，在体内多种组织均有表 基于以上分析，本项目拟在以往实验基础上，借助我们多年研究生物人工肝的工 军医进修学院博士学位论文 生物人工肝及其治疗肝衰竭的新概念，具有广泛的应用前景。 军医进修学院博士学位论文 人肝再生增强因子重组质粒的构建及鉴定 肝再生增强因子????? ??主要试剂 焦碳酸二乙酯??? ???公司 ?????珼? 美国?????公司 去内毒素小量质粒提取试剂盒 军医进修学院博士学位论文 美国??甊?公司 低温离心机 上海一恒科技有限公司 ??分光光度计美国??甊?公司 ? 养基冷却至?。?螅?尤氚避星嗝顾匾禾迦?张ǘ????。 ??碱????冰乙酸??? ???畂??ダ胱铀?ㄈ葜?????ぷ饕???。 ??％琼脂糖凝胶制备称取???碇?欠郏?诺揭蛔缎纹恐校?尤? 军医进修学院博士学位论文 ?磍? ①引物的设计根据????斜ǜ娴腁? ??序列，应用引物设计软件设 生物有限公司合成。 军医进修学院博士学位论文 ??琹此??? ?????琹? ??? 胶电泳检测，所获目的片段命名为??。 ?? 量小地切胶，放入离心管中称重，减去离心管的重量后计算胶净重。 物，放入??水浴中直至溶解。室温以????离心??。 柱中，室温放置??。 ⑤室温????离心??，从收集管中取出离心柱，弃去收集管中液体，将离 心柱重新插入收集管中。 圈?? ?怠０避星嗝顾?至适宜 ??质粒的提取纯化 ?培养液中，??，???振荡 过夜培养。 军医进修学院博士学位论文 ?????叩估胄墓?次以充分混合，孵育至细胞 ?????叩估胄墓?次，室温孵育??。 ?????⒀杆俚叩估胄墓?次以充分混合。 ⑧加????畉???サ木凭?∈偷闹?慈芤??? 离，???，从收集管中取出离心管并弃去收集管中的液体，将离心柱重新插入收集 去离子水 ? ???? 内切酶 ??％琼脂糖凝胶电泳后回收 ?●?馡?，?駆●? 军医进修学院博士学位论文 ? ? ? ??? ??双酶切鉴定 ? 器离 ??取酶切后的电泳圈??重组质粒经?? ???????重组质粒经???虰??取酶切后电泳围 ???ッ盖校? ?籊????? ? ?????????????????????????????? ??轈?????∞丌????????仳?????鞢?? ????????? ??? ?????萒????璗 ? 军医进修学院博士学位论文 至关重要的，而且也具有巯基氧化酶活性。研究证实，??ü鼺?