医学微生物学跟免疫学实验.doc

PAGE PAGE 12 微生物与寄生虫学实验指导目录 实验一 微生物的形态学检测 （2学时） 实验二 理化因素对微生物的影响（2学时） 实验三 肠道致病性细菌的分离与鉴定（4学时） 实验四 抗酸染色（2学时） 实验五 寄生虫学实验（2学时） 微生物与寄生虫学实验 序 言 本实验在于使学生加深和巩固课堂内容，并在掌握系统理论知识的基础上，学习微生物与寄生虫学的基本操作技能，通过实验加强无菌概念，培养独立工作和分析问题的能力，为今后有关的疾病诊断与中医中药的科学研究工作打下良好的基础。 本实验指导共包括五个试验项目，共计教学12学时，按教学计划及大纲要求供我院中医学专业、针灸推拿专业、骨伤学专业、护理学专业、中西医结合等专业学生使用。 实 验 室 规 则 本门学科实验的对象大多是病原微生物，如果不慎发生意外，不仅自身可能遭致感染，并有可能将病原微生物传给他人。因此，进入实验室必须遵守以下规则： 1. 非实验必需物品，不准带进实验室。 2．进入实验室必须穿工作服，按规定就座，保持肃静。 3．上实验课要严格遵守课堂纪律，不得高声谈笑及乱动物品，禁止吸烟和进食。 4． 实验时听从老师指导，牢固树立无菌观点，严格遵守无菌操作规程，若发生菌液污染，损坏物品等事故，应立即报告老师及时处理。 5．实验中用过的染菌器材如吸管，试管和用过的玻片等应及时放人含有消毒液的容器内，不得放在桌上，也不可在水槽里冲洗。 6．爱护公物，节约使用实验材料；注意安全使用水、电、煤气。 7．实验完毕，按要求整理器材物品，打扫卫生。脱下工作服，消毒洗手后，离开实验室。 8．作业应在规定时间内完成，实验报告要求简洁扼要，字迹清楚，画图力求正确、客观。 实验一 微生物的形态学检测 一、实验目的 1、掌握细菌的基本形态（球菌、杆菌、弧菌）。 2、掌握革兰氏染色的操作方法。 3、熟悉生物显微镜的使用，特别是油镜的使用和保护； 4、熟悉革兰氏染色的原理。 二、实验内容 （一） 显微镜油镜的使用及保护 1、原理：在一般微生物学实验中最常使用的是普通光学显微镜的油镜。油镜镜头透镜很小，进入镜筒的光线很少，使用时为了增加亮度，必须在标本玻片与油镜头之间，滴加香柏油，因为香柏油的折光率与载玻片相似，这样就可使通过聚光器进入载玻片的光线不会因折射而散失，几乎全部进入镜筒内，使视野明亮，物象清楚。 2、材料与试剂 生物显微镜及香柏油、二甲苯、标本片等。 3、操作步骤 坐姿：使用显微镜油镜时，必须坐端，镜体保持垂直位，不要使载物台倾斜，以免香柏油或悬液标本流出。 （2）识别油镜头：油镜头上一般刻有“ X 100”， “Oil”，“HI” （3）对光：用低倍镜对光，检查染色标本时光线宜强，要抬高聚光器，放大光圈，取得最大亮度。 （4）滴加香柏油：将标本放在载物台上固定好。滴加香柏油1滴，换油镜检查。 （5）找焦点：将油镜移至中央对准标本，从侧面注视镜头，并缓慢转动粗螺旋，使物镜筒下降，直至镜头浸于香柏油中并几乎接触到标本为止。然后将视线移至目镜，一面观察一面向上慢慢转动粗螺旋，待看到模糊的物象时，即改用细螺旋，调节焦点以寻求清晰的物象。 （6）清洁保养：镜检完毕，将镜筒升起，取出标本片，用镜纸将镜头上的油擦净。若油已干，可用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去油迹，再用擦镜纸揩去二甲苯。然后，将聚光镜降下，各物镜呈“八”字形，套好保护套。 （二）细菌的革兰氏染色法 1、原理 G+菌细胞壁结构致密（肽聚糖层厚），且脂质含量少，乙醇不易渗入脱色。G-菌细胞壁结构疏松（肽聚糖层薄），且脂质含量多，乙醇溶解脂质后易渗入细胞而脱色。G+菌菌体含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不被乙醇脱色；G-菌菌体内核糖核酸镁盐含量小，易被乙醇脱色。G+菌等电点比G-菌低，在同一pH值条件下阳性菌比阴性菌所带负电荷要多，故与带正电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，不易被乙醇脱色。 2、材料 金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌培养液、接种环、酒精灯、革兰染色液（结晶紫、卢戈碘液、95％乙醇、复红或沙黄染液）。 3、操作步骤 （1）标本片制备 ①取干净载玻片l块，用玻璃铅笔划一个区域。 ②接种环按无菌操作法挑取少许菌液于区域中涂成一薄层，接种环在火焰上烧灼灭菌。 ③在室温下自然干燥。 ④将玻片通过火焰3次固定标本，自然冷却。 （2）染色 ①初染：在固定好并已冷却的涂片标本上滴加结晶紫染液，要盖满菌膜。约1分钟后用细水流从玻片的一端把游离的染液洗去。 ②媒染：滴加卢戈碘液数滴，作用l分钟后，轻轻水洗。 ③脱色：在玻片上加95％乙醇2～3滴，并轻轻转动玻片数秒钟，使玻片倾斜让乙醇流去，如此重复数次，直至流下的乙醇几乎无色或稍呈淡紫色，流水冲洗。 ④复染：滴加稀释复