玉米热损伤的测定方法（编制说明）.doc

PAGE PAGE 5 《玉米热损伤的测定方法》编制说明 《玉米热损伤的测定方法》起草组 国家粮食储备局无锡粮食科学研究设计院 １．工作简况 本标准是部分参照 目前最常用的蛋白质测定方法之一--Bradford 检测法制订。本标准由国家粮食储备局无锡科学研究设计院提出；本标准由国家质量监督局批准；本标准起草单位为国家粮食储备局无锡科学研究设计院。 本标准主要工作过程为： 进行广泛的资料调研，掌握国内外相关标准状况的基础上，拟订要研究的技术指标；对收集到的烘干玉米的测定方法和相关指标，综合考虑国外资料、国际国内生产、使用现状，确定相关技术指标及其他内容。 寻找合作单位，对等效引用的Bradford检测法的有效性通过具体实验进行验证，并根据玉米的实际情况对标准方法的检验指标进行了适当调整。最终形成本国家标准《玉米热损伤的测定方法》（征求意见稿）。 编写编制说明。本标准组织征求国内10家具有代表性的企业、科研、教学单位用户的意见，对返回的意见进行汇总和处理工作。 据汇总意见对标准征求意见稿进行修改和完善，制定出标准草案送审稿并重新编写编制说明。由国家粮食局标准质量中心组织全国范围内具有代表性的有关用户及专家进行标准草案的审查工作。 ２．国家标准编制原则和确定国家标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、实验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据），修订国家标准时，应增列新旧国家标准水平的对比 2.1 国家标准主要内容的确定： 2.1.1检测项目的确定： 玉米热损伤主要是由于玉米在烘干过程中，由于温度过高（通常干燥玉米时，烘干塔列管温度一般在150℃以上），导致玉米内部的化学结构有了明显的变化：淀粉糊化、蛋白变性等。因而烘干过程中可溶性物质溶出量少，从而降低了玉米食用品质，影响了玉米深加工（尤其是湿法生产玉米淀粉）的产品得率和质量。由于蛋白变性，烘干玉米中盐溶性蛋白含量下降，可通过盐溶性蛋白含量的多少来测定玉米热损伤的程度。 2.1.2检测方法的确定： Bradford 检测法是目前最常用的蛋白质测定方法之一，它是一种迅速、可靠的通过染色法测定溶液中蛋白质的方法。这一方法是基于考马斯亮蓝G-250有红、蓝两种不同颜色的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465～595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。该方法的特点： 1. 检测速度快，10-20个样品只需不足10min即可完成。 2. 灵敏度高，最小检测蛋白量达到2.5μg，待测样品体积为0.1ml。 3. 在2.5-15μg浓度范围内有较好的线性关系。 4.与Lowry法相比，Bradford法测定蛋白浓度不受多种化学物质的干扰(包括b-巯基乙醇，二硫苏糖醇)。 2.2 引用实验方法验证数据： 为了保证验证结果的权威和准确，并具有广泛的代表性，我们对玉米按该标准规定的方法进行验证，验证数据结果参见实验报告（一）和实验报告（二）。 实验报告（一） 一. 目的和意义 通过回收率的测定，验证Bradford 检测法用于玉米热损伤测定的正确性。 二. 试验原理（见前） 实验方法及步骤 1. 标准曲线的制作（见前） 2. 样品的处理（见前） 3. 回收率的测定 取50g干净的样品。预粉碎，称取25g预粉碎样品，加入0.075g牛血清白蛋白，冷冻粉碎1min，其余操作同上。 加标回收率(%)=×100% 四． 结果与讨论 4.1 样品水分 样品中水分含量13.65%。 4.2 标准曲线 4.3 样品中蛋白及回收率的测定 分别取加标和没加标的样品各5g，则实验用玉米中的蛋白含量为2.62mg/g，加标后玉米中蛋白含量为5.44。 根据加标回收率的定义测得回收率为94%，回收率大于85%，所以该方法准确可靠。 实验报告（二） 一. 目的和意义 用Bradford 检测法通过对不同烘干温度下烘干玉米的可溶性蛋白质含量的测定，说明烘干温度对玉米热损伤的影响。 二. 试验原理（见前） 实验方法及步骤 1. 标准曲线的制作（见前） 2. 湿玉米样品的烘干 分别称取原始玉米100g，采用自然风干、40℃、60℃、80℃、100℃、 3. 不同处理温度下的玉米水分含量的测定（同前） 4. 不同处理温度下的玉米盐溶性蛋白含量的测定（同前） 蛋白损失量 (%)=×100% 四． 结果与讨论 4.1 标准曲线 4.2 不同烘干温度下的玉米盐溶性蛋白和水分含量 烘干条件 水分（%） 蛋白含量（干基mg/g） 蛋白损失量（%） 120℃烘干 13.56 1.25 83.49 100℃烘干 13.65 2.12 71