玉米热损伤的测定方法（国家标准征求意见稿）.doc

GB/T ××××—×××× PAGE II PAGE I 国家质量监督检验检疫总局 发布××××-××-××实施××××- 国家质量监督检验检疫总局 发布 ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 玉米热损伤的测定方法 Determination of thermal destruction （征求意见稿） GB/T ××××—×××× 代替GB/T 8609-1988, GB/T 8610-1988 中华人民共和国国家标准 ICS GB/T ××××—×××× PAGE 4 前 言 本标准是建立在经典方法—Bradford检测法基础上的玉米中可溶性蛋白质检测方法。 本标准等效采用Bradford 检测法。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家粮食局提出。 本标准由国家粮食局标准质量管理办公室归口。 负责起草单位：国家粮食储备局无锡科学研究设计院。 本标准主要起草人：郝慧英、蒋蕴珍、朱小兵、刘小平、郭善辉。 玉米热损伤的测定方法 范围 本标准规定了分光光度计法测定玉米中可溶性蛋白的方法。 本标准适用于新鲜、烘干及晾晒的玉米。 规范性应用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。 GB 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T 5497 粮食、油料检验 水分测定法 术语 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 热损伤thermal destruction 烘干玉米中在高温下，内部的化学结构都有了明显的变化，蛋白变性使可溶性蛋白的含量减少。以1 原理 玉米高温烘干后，蛋白质变性，可溶性蛋白的含量降低。用盐溶液提取粉碎后玉米中的可溶性蛋白，用考马斯兰溶液染色，当与蛋白质结合后，反应迅速而稳定，产生蓝色化合物。反应化合物在595 nm处有最大的光吸收值，用分光光度计测定595 nm处的光吸收值的大小来计算可溶性蛋白的浓度。 试剂 牛血清白蛋白（BSA）母液：称取一定量的牛血清白蛋白，用提取液（5.4）配置浓度为1mg/mL的牛血清白蛋白母液。 Bradford 贮存液：将350 mg Serva G蓝溶解于用100 mL95%乙醇和200 mL85%磷酸配成的混合液中，室温下长期保持稳定。 Bradford工作液：将15 mL95%乙醇、30 mL85%磷酸、30 mLBradford 贮存液和425 mL双蒸水混合， 用Whatman1号滤纸过滤，保存于室温棕色瓶中，可使用数周，但在使用前需要再过滤。 提取液：称取6.8 gKH2PO4 , 2.1 gK2HPO4 和10 g NaCL ,溶于蒸馏水中，定溶于1000 mL。 仪器 三角瓶：250 mL。 容量瓶：10 mL，1000 mL。 微量进样器: 10μL，100μL。 粉碎机：筛孔1.0 mm。 分光光度计：波长范围340 nm～900 nm。 电子天平：感量0.0001 g。 电子天平：感量0.01 磁力搅拌器。 恒温烘箱：温度能控制在(130±2)℃。 干燥器：内有有效充足的干燥剂和一个多孔金属厚板。 Whatman 1 号滤纸。 比色杯：1.0 cm。 分析步骤 标准曲线的制备 取七只10 mL的容量瓶，用微量进样器分别移取1.0 mg/mL牛血清白蛋白母液（5.1）0.0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL，加入到七个小试管中，补加提取液至100 μL，再加入3 mL Bradford工作液并振荡混匀，将混匀的液体静止放置2 min后测A595nm值，测量工作在1 h内完成。 用1 cm比色 样品的处理 取具有代表性的样品至少200 g，按GB 5491法取50 g干净的样品。称取 盐溶性蛋白的提取 取样 若13.5%≤玉米水份≤16.5%，则称取测试小样5 g， 若玉米水份＜13.5%或＞16.5%，按附录A把样品烘干至规定水分，按干基折算样品所需量。 将称取的样品放入250 mL的三角瓶中，加入100 mL提取液（5.4），精确搅拌3 min，控制磁力搅拌速度防止起泡。 样品制备 将搅拌后的溶液用滤纸过滤，滤液用10 mL的试管收集，取11 mL～20 mL的样品用来测定。取50 μL滤液加入到小试管中，补