基因工程项目基本操作程序2.ppt

1．1　DNA重组技术的基本工具 1．2　基因工程的基本操作程序 高频考点突破 1．1　DNA重组技术的基本工具 基础自主梳理 命题视角剖析 即时达标训练 1．2　基因工程的基本操作程序 基础自主梳理 一、DNA重组技术的基本工具 1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)主要来源：原核生物。 (2)特点：能够识别DNA特定的___________，切开两个核苷酸之间的______________。 (3)DNA末端：限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式：____________和平末端。 核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 2．DNA连接酶——“分子缝合针” (1)作用：将双链___________ “缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的__________。 (2)种类 ①E·coli DNA连接酶：只能缝合DNA的黏性末端. ②T4DNA连接酶：既可缝合DNA的黏性末端，又可缝合双链DNA的_______。 3．基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” (1)载体的种类 ①质粒。 ②噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 DNA片段 磷酸二酯键 平末端 (2)质粒载体的特点 ①能够在细胞内自我复制。 ②具有一个或多个_______________，便于供外源DNA片段插入其中。 ③具有特殊的遗传标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 (1)目的基因：指编码蛋白质的___________。 (2)获取目的基因的方法 ①从基因文库中获取目的基因 限制酶切割位点 结构基因 受体菌 所有 c．目的基因的获取依据： (ⅰ)基因的核苷酸序列； (ⅱ)基因的功能； (ⅲ)基因在染色体上的位置； (ⅳ)基因的转录产物mRNA； (ⅴ)基因的翻译产物蛋白质。 ②利用PCR技术扩增目的基因 a．PCR的含义：是一项在生物体外____特定DNA片段的核酸合成技术。 b．条件：已知基因的核苷酸序列。 ?c．过程：目的基因受热形成单链DNA，与引物结合，在___________的作用下延伸形成DNA。 d．方式：指数扩增＝2n(n为扩增循环的次数) 复制 DNA聚合酶 元贝驾考 元贝驾考2016科目一 科目四驾考宝典网 / 驾考宝典2016科目一 科目四 ③人工合成法：若基因较小、核苷酸序列已知，可以人工合成。 2．基因表达载体的构建 (1)表达载体的组成：目的基因＋________＋终止子＋标记基因。 (2)表达载体的功能 ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代。 ②使目的基因_______和发挥作用。 (3)启动子：位于基因的_____，它是___________识别和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 (4)终止子：位于基因的尾端，终止mRNA的转录。 (5)标记基因：鉴别受体细胞是否含有目的基因。 启动子 表达 首端 RNA聚合酶 3．将目的基因导入受体细胞 转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持____________的过程。 (1)将目的基因导入植物细胞 方法：农杆菌转化法；_______枪法；花粉管通道法。 (2)将目的基因导入动物细胞 ①方法：_____注射技术。 ②操作程序：目的基因表达载体______―→取卵(受精卵)―→显微注射―→移植到雌性动物体内―→新性状的动物。 稳定和表达 基因 显微 提纯 (3)将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、多为_______、遗传物质少。 ②转化：用Ca2＋处理细胞―→感受态细胞―→表达载体与感受态细胞混合―→促感受态细胞吸收DNA分子。 单细胞 4．目的基因的检测与鉴定 (1)检测 ①方法：采用______________技术，抗原－抗体杂交技术。 ②内容： a．检测转基因生物的染色体DNA上的目的基因。 b．检测目的基因是否转录出了________。 c．检测目的基因是否翻译成________。 (2)鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定等。 DNA分子杂交 mRNA 蛋白质 高频考点突破 基因工程的基本工具 【易误警示】　限制酶与DNA连接酶的关系 ①限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 ②DNA连接酶起作用时不需要模板。 即时应用(随学随练，轻松夺冠) 1．(2009年高考浙江卷)下列关于基因工程的叙述，错误的是(　　) A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 解析：选D。基因工程中目的基因来源于自然界中的含有目的性状的一切生物，可以是动物、植物，也可