变异链球菌clpcp蛋白酶作用机制的初步研究-临床检验诊断学专业论文.docx

福建医科大学硕士学位论文 福建医科大学硕士学位论文 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 中英文缩略词表 1 HYPERLINK \l _bookmark1 中文摘要 1 HYPERLINK \l _bookmark2 ABSTRACT 4 HYPERLINK \l _bookmark3 引言 7 HYPERLINK \l _bookmark4 第一部分 clpP/clpC 基因缺陷株及补偿菌株的构建 7 HYPERLINK \l _bookmark5 1. 实验材料 9 HYPERLINK \l _bookmark6 2. 实验方法 11 HYPERLINK \l _bookmark7 3. 实验结果 29 HYPERLINK \l _bookmark8 4. 讨论 36 HYPERLINK \l _bookmark9 5. 结论 37 HYPERLINK \l _bookmark10 第二部分 ClpCP 蛋白酶在变异链球菌抵抗外界压力中的作用 38 HYPERLINK \l _bookmark11 1. 实验材料 38 HYPERLINK \l _bookmark12 2. 实验方法 39 HYPERLINK \l _bookmark13 3. 实验结果 46 HYPERLINK \l _bookmark14 4. 讨论57 HYPERLINK \l _bookmark15 5. 结论62 HYPERLINK \l _bookmark16 附图 63 HYPERLINK \l _bookmark17 参考文献 67 HYPERLINK \l _bookmark18 致 谢 70 HYPERLINK \l _bookmark19 综述 72 中英文缩略词表 缩写词 英文全称 中文全称 AMP Ampicillin 氨苄青霉素 KAN Kannamycin 卡那霉素 ERY Erythromycin 红霉素 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 dNTP Deoxyribonucleoside triphosphate 脱氧核糖核苷三磷酸 dATP 2-deoxyadenosine 5-triphosphate 三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸 THY CSP Todd-Hewitt Broth plus Yeast Extract Competence-stimulating peptide THY 培养基 感受态刺激肽 LB EB Luria-Betani Medium Ethidium bromide LB 培养基 溴化乙锭 cDNA ORF complementary DNA open reading frame 互补 DNA 开放阅读框 bp Base pair(s) 碱基对 kb kilobase(s) or 1000bp 千碱基对 Dnase Deoxyribonuclease 脱氧核糖核酸酶 g Gravity 离心力（重力） rpm rotation per minute 每分钟的转速 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 h hour 小时 min minute 分钟 s second 秒 PAGE PAGE 10 中文摘要 目的： Clp 蛋白酶广泛存在于各种生物体，尤其是低 GC 含量的革兰阳性菌中。研究 发现在外界应激条件下，Clp 蛋白酶可以通过重新折叠或降解的方式，对错误折叠 并累积的蛋白质进行修正或者清除。研究发现，Clp 蛋白酶由催化亚基和调节亚基 构成，其中催化亚基为含有丝氨酸蛋白酶活性位点的 ClpP 蛋白，调节亚基为存在 于细菌中高度保守的 Clp ATP 酶。 ClpC 作为 Clp ATP 酶的重要成员之一，可与 ClpP 蛋白发生特异性结合形成 ClpCP，参与由 McsAB 介导的热休克蛋白 CtsR 的降解。在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis, B. subtilis）中，ClpCP 蛋白酶可借由 MecA 蛋白的介导参与其感受态形成 系统 ComK/S 的转录，调控 B. subtilis 感受态细胞的形成。研究证实，变异链球菌 (Streptococcus mutans, S. mutans)与 B. subtilis 同为低 GC 含量的革兰阳性菌，且 Clp 蛋白水解系统具有较高的同源性。同源性比对证实，变异链球菌中存在着 ClpP 和 五种 Clp ATP 酶，包括：ClpB、ClpC、ClpE、ClpL 和 ClpX。因此，本研究拟构建 变异链球菌 S. mutans