铜锌离子对凯特杏膜脂过氧化及抗氧化酶活性影响.docVIP

铜锌离子对凯特杏膜脂过氧化及抗氧化酶活性影响 　　摘 要:对不同铜、锌处理下凯特杏体内的丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性的动态变化进行测定,结果表明:铜离子不利于凯特杏细胞膜的稳定,而锌离子有利于凯特杏细胞膜的稳定。 　　关键词:铜;锌;凯特杏;抗氧化酶活性;膜脂过氧化 　　中图分类号:S662.201文献标识号:A文章编号:1001-4942(2010)02-0043-04 　　 　　活性氧自由基与细胞衰老死亡关系的研究正在日益深入。业已知道,在细胞衰老死亡过程中,植物体内产生大量带有奇数电子,即带有未配对自由电子的化学物质――自由基,它们具有高反应活性,不仅其本身可以损伤细胞结构,而且还能与细胞中产生的H??2O??2等反应生成其它自由基。类脂是膜结构的主要组成部分,通常是由不饱和脂肪酸组成的,膜脂过氧化作用就是在氧自由基的诱导下发生在生物膜不饱和脂肪酸中的一系列自由基反应。脂质过氧化形成的脂氢过氧化物(LOOH)不稳定,并能自发地发生均裂形成脂性自由基(LOO#8226;,LO#8226;)。它们非常活泼,一方面连锁地引发脂质过氧化作用,另一方面又能引发蛋白质分子脱H??+而生成蛋白质自由基(P#8226;),蛋白质自由基与另一分子蛋白质发生加成反应,生成二聚蛋白质自由基,依次对蛋白质不断加成(链式聚合作用)而生成蛋白质分子聚合物。同时LOOH亦可分解产生丙二醛,它可与蛋白质分子交联形成交联物,使膜系统发生变性,最终导致细胞损伤或死亡。 　　SOD、POD、CAT等是能清除机体内超氧阴离子自由基O??-??2#8226;)、羟基自由基(#8226;OH )和H??2O??2等有害物质的抗氧化酶类,均含有不同的金属辅基,他们与酶的结构及活性有着直接的关系,当用透析等方法制备成脱辅酶后,酶的活性几乎全部丧失。在酶的制备和测活过程中,人为补加与辅基相同或不同的离子后,酶的功能和活性均会发生相应的变化。本文研究了不同处理铜离子和锌离子对凯特杏体内SOD和POD活性的影响,这对揭示抗氧化酶结构与功能的关系,为果实保鲜提供了科学的依据。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 试验材料 　　以凯特杏为试材,均选果形端正、果实充分发育、果肉有一定硬度、八成熟的无机械伤、无虫害的一级果采摘。 　　将采摘的凯特杏置于不同处理溶液中浸泡15 min后取出,一部分于常温下放置一周,用于测定MDA含量;另一部分于不同温度下处理2 h后测定SOD和POD活性,温度处理从10℃开始,每增加5℃测定一次,到60℃为止。 　　1.3 测定方法 　　1.3.1 SOD活性测定 参考王金胜的方法。分别称取凯特杏果肉样品0.5000 g于研钵中,加入50 mmol/L磷酸缓冲液(pH 7.0) 3 ml,冰浴研磨至匀浆,转入离心管中,于13 000×g冷冻离心10 min,取上清,即为酶提取液。取3支试管,分别编号1、2、3,加入3.9 ml NBT反应介质[用50 mmol/L磷酸缓冲液(pH 7.8)配制而成,内含77.12 μmol/L NBT,0.1 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA),13.37 mol/L 蛋氨酸];1、2号试管再加入0.01 ml酶液,混合均匀,3号试管不加酶液用50 mmol/L磷酸缓冲液(pH 7.0) 0.01 ml代替;最后向各试管中加入80.2 μmol/L核黄素溶液0.1 ml摇匀,将2号试管用黑纸包上,与其它试管一起放于4 000 lx的荧光灯下光照25 min,取出,以2号试管为空白,测定560 nm处的吸光值。SOD 活性依下式计算: 　　SOD活性(U/gFW)=ΔA×N/(A0×W×0.01×50%) 　　其中,A0为3号试管溶液在560 nm处吸光值;ΔA为3号试管溶液与加酶液管的反应液在560 nm处吸光值的差;N为酶液总体积;W为提取酶液材料鲜重;0.01为反应体系中加入的酶液体积;50%表示以抑制NBT光化还原反应的50%为一个酶活力单位。 　　1.3.2 POD活性的测定 采用愈创木酚法。分别称取各待测凯特杏果肉样品0.5000 g,加入PVP 0.25 g及少量石英砂和0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0) 5 ml,冰浴研磨成匀浆,转入离心管中,于10 000×g冷冻离心10 min,取上清,即为酶提取液。取10 ml试管,加入0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0) 2.9 ml +0.05 mol/L愈创木酚1 ml +酶液1 ml,立即置于30℃水浴保温3 min,然后加入2% H??2O??2 1 ml继续保温1 min,取出立即测定470 nm处吸光度值,每隔60 s读数一次,共读五次。以