水草组织培养实验室布局与基本技术.pptVIP

3．在培养基中加活性炭、抗氧化剂和其他抑制剂 在培养基中加入0.1%～0.5%的活性炭对吸附酚类氧化物的效果很明显。在许多热带树木的组织培养中均曾观察到活性炭防止外植体褐变的明显效果。如在培养基中加抗坏血酸、血清白蛋白、有机酸、蛋白质、氨基酸等抗氧化剂和其他抑制剂，或用它们进行材料的预处理或预培养，可有效地预防醌类物质的形成。 4．缩短转瓶周期 这是组培中控制褐变常用且有效的方法。 四、玻璃化现象 是指组培苗出现叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表皮缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织；体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低的现象。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 （一）玻璃化苗的危害性 由于其组织畸形，吸收养料与光合器官功能不全，分化能力大大降低，因而很难继续用作继代培养和扩大繁殖的材料；加上生根困难，很难移栽成活。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 （二）玻璃化的原因 玻璃化的起因是细胞生长过程中的环境变化。试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。 产生玻璃化苗的因素主要有激素浓度、琼脂用量、温度、离子水平、光照时间、通风条件等。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 1、激素浓度  激素浓度增加尤其是细胞分裂素浓度提高（或细胞分裂素与生长素比例高），易导致玻璃化苗的产生。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 2、琼脂浓度  培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，水浸状严重，苗向上长。随着琼脂浓度的增加，玻璃化苗比例减少，但由于硬化的培养基影响了养分的吸收，试管苗生长减慢，分蘖亦减少。因此，琼脂的浓度一定要适当。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 3、温度  适宜的温度可以使试管苗生长良好，当温度低时，容易形成玻璃化苗，温度越低玻璃化苗的比例越高。温度高时玻璃化苗减少，且发生的时间较晚。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 4、光照时间  不同的植物对光照的要求不同，满足植物的光照时间，试管苗才能生长正常。大多数植物在12h～14h光照下都能生长良好，光照时数大于16h时，玻璃化苗的比例明显增加。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 5、通风条件 试管苗生长期间，要求有足够的气体交换，气体交换的好坏取决于生长量、瓶内空间、培养时间和瓶盖种类。在一定容量的培养瓶内，愈伤组织和试管苗生长越快，越容易形成玻璃化苗。如果培养瓶容量小，气体交换不良，易发生玻璃化。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 6、离子水平 植物生长需要一定的矿物质营养，但是，如果营养离子之间失去平衡，试管苗生长就会受到影响。植物种类不同，对矿物质的量、离子形态、离子间的比例要求不同。如果培养基中离子种类及其比例不适宜该种植物，玻璃化苗的比例就会增加。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 （三）预防玻璃化的措施 1．适当控制培养基中无机营养成分 大多数植物在MS培养基上生长良好，玻璃化苗的比例较低，主要是由于MS培养基的硝态氮、钙、锌、锰的含量较高的缘故。适当增加培养基中钙、锌、锰、钾、铁、铜、镁的含量，降低氮和氯元素比例，特别是降低铵态氮浓度，提高硝态氮浓度，可减少玻璃化苗的比例。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 2．适当提高培养基中蔗糖和琼脂的浓度  适当提高培养基中蔗糖的含量，可降低培养基中的渗透势，减少外植体从培养基中可获得的水分；而适当提高培养基中琼脂的含量，可降低培养基的衬质势，造成细胞吸水阻遏，也可降低玻璃化。如将琼脂浓度提高到1.1%时，洋蓟的玻璃化苗完全消失。 青岛农业大学海洋科学与工程学院 衬质势 因衬质成分表面吸附力(细胞胶体物质亲水性和毛细管对自由水束缚)而产生的水势。 由于某种原因而降低的水化学势而言。吸附在土壤粒子和细胞壁微纤维上的水，可分为（1）基于土壤粒子表面强有力的吸附力，主要是2—3层的水分子；（2）表现为来自弯月形液面的表面张力的毛细管水；（3）表面电荷与水的氢结合所吸附的水。在这些情况下，作用力可使水的势能降低。 渗透势 溶液中由溶质存在所产生的水势。因为溶质对水分子的吸附作用，使水的活性下降，所以和纯水相比，含有溶质的水做功的能力降低了，故渗透势为负值。 细胞吸水情况取决于细胞水势，典型的水势是由三个势组成的：Ψw=Ψπ+Ψp+Ψg Ψw为细胞水势，Ψπ为渗透势Ψp为压力势，Ψg为重力势。渗透势亦称溶质势渗透势是由于溶质颗粒的存在，降低了水的自由能，因而其水势低于纯水的水势,这种水势差即为渗透势。因为纯水水势被定为零，所以渗透势为负值。某溶液渗透势的绝对值与该溶液渗透压的绝对值相等。在标准压力下，