实验十三卵磷脂的提取和其组成鉴定.pptVIP

实验十三 卵磷脂的提取及其 组成鉴定 一、实验目的 学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。 巩固抽滤等基本操作。 主讲教师： 二、基本原理 卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约8％。可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。卵磷脂可在碱性溶液中加热水解，得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱，可从水解液中检查出这些组分。其分离提取的流程如下： 三、仪器和药品 仪器：研钵 布氏漏斗 蒸发皿 棉花 药品：熟鸡蛋黄 20％NaOH溶液 10％Pb(AC)2 1％CuSO4溶液 硫酸 95％乙醇 氯仿 丙酮 碘化铋钾溶液 四、实验步骤 1．卵磷脂的提取 （1）取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml 95％乙醇研磨，再加入10ml 95％乙醇充分研磨，减压过滤(应盖满漏斗)，布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，再加10ml 95％乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并二次滤液，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。 （2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物。 （3）冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解。 （4）在搅拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出， 搅动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶内）。 2．卵磷脂的水解及其组成鉴定 （1）水解：取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加入5ml 20％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，并用玻棒加以搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤。滤液供下面检查用。 （2）检查 脂肪酸的检查：取棉花上沉淀(滤饼)少许，加1滴20％氢氧化钠溶液与5ml水，用玻棒搅拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液，以硝酸酸化后加入10％醋酸铅2滴，观察溶液的变化 甘油的检查：取试管一支，加入1％硫酸铜溶液1ml(二十滴)，2滴 20％氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入1ml水解液 振摇，观察所得结果。 胆碱的检查：取水解液1ml，滴加硫酸使其酸化（以pH试纸试之）加入1滴克劳特试剂（碘化铋钾溶液），有砖红色沉淀生成。 [注释] 1. 第一次减压过滤，因刚析出的醇中不溶物很细以及有少许水份， 滤出物浑浊，放置后继续有沉淀析出，需合并滤液后，以原布氏 漏 斗（不换滤纸）反复滤清。 2. 蒸去乙醇时，可能最后有少许水份，需搅动加速蒸发，务使蒸干。 3. 黄色油状物干后，蒸发皿壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中，否则会带入杂质。 4. 搅动时，析出的卵磷脂可粘附于玻棒上，成团状。 5. 加热时，会促使胆碱分解，产生三甲胺的臭味。 6. 加硝酸酸化，脂肪酸析出，溶液变浑浊，加醋酸铅有脂肪酸铅盐生成，浑浊进一步增强。 7. 生成的氢氧化铜沉淀．因水解液中的甘油与之反应，生成甘油铜，沉淀逐步溶解。 8. 克劳特试剂为含有KI－BiI3复盐的有色溶液，与含氮碱性化合物如胆碱生成砖红色的沉淀。 思考题： 1．蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？ 2．卵磷脂可以皂化，从结构分析应作 何解释？ 3．卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？ 4．为什么实验中要进行减压过滤？ 操作时应注意哪些地方？ * 完全水解 HO C H C H 2 OH C H 2 OH R 1 C O OH R 2 C O OH + C H 2 C H 2 N ( C H 3 ) 3 HO OH－ P O HO OH OH 甘油 脂肪酸 磷酸 胆碱 答： *