HE染色和尼氏染色.docVIP

HE染色 一．HE染色简介： 苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。 HYPERLINK /view/346093.htm \t _blank 苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和 HYPERLINK /view/237186.htm \t _blank 细胞外基质中的成分着红色 。 由于组织或细胞的不同成分对 HYPERLINK /view/346093.htm \t _blank 苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经 HYPERLINK /view/346093.htm \t _blank 苏木精染色后， HYPERLINK /view/32286.htm \t _blank 细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸 HYPERLINK /view/1722.htm \t _blank 酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。 实验步骤： 脱蜡： 将石蜡切片在65℃烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）浸泡，各15min；2.水化： 无水酒精（100%乙醇）2min，下行至90%、80%、70%酒精各2min，蒸馏水（Ⅰ）、（Ⅱ）各2min； 3．染色： 石蜡画圈，用滴管滴加苏木素在脑片上，放湿盒40s；（苏木素需要回收） 4.流水浸洗： 把玻片装入玻片铁架子里，在1L烧杯里用自来水对玻片进行流水浸洗；（脑片不要对着水流直接冲） 5.1%盐酸酒精分化： 快速提拉2-3下，用时3-5s左右；6.流水浸洗：自来水洗3次，每次20min； 7.伊红染色：时间15min； 8.流水浸洗； 9.脱水：先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3s，以颜色适宜为准，再放入通风橱中脱水，70%、80%、90% 2-3s，100%酒精Ⅰ、Ⅱ 1min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ 2min； 10．封片： 上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡 三．结果的判断： 3.1实验结果： 细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。 着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。 3.2 HE染色评定标准： （1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕； （2）染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。 四．注意事项：1．染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同的染色液染色后的处理是不一样的。 2．染色过程中所用的时间以及酒精梯度脱水的选择要根据染色时的室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况等灵活掌握。在室温高、切片、染色液又是新配制的，染色时间就要短，反之时间就长。 尼氏染色 一．尼氏染色简介：常用的碱性染料有Cresyl violet (焦油紫，甲酚紫，克紫）；thionine (硫荲)；tolridine blue (甲苯胺蓝)等。我们主要掌握的是焦油紫染色。 二．实验步骤： 1.脱蜡：将石蜡切片在65℃烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）浸泡，各15min；2.水化：无水酒精（100%乙醇）2min，下行至90%、80%、70%酒精各2min，蒸馏水（Ⅰ）、（Ⅱ）各2min；3．染色：石蜡画圈，用滴管滴加焦油紫在脑片上，放湿盒15s；（焦油紫需要回收）4.流水浸洗：把玻片装入玻片铁架子里，在1L烧杯里用自来水对玻片进行流水浸洗；（脑片不要对着水流直接冲）5.流水浸洗；9.脱水：先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3s，以颜色适宜为准，再放入通风橱中脱水，70%、80%、90% 2-3s，100%酒精Ⅰ、Ⅱ 1min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ 2min；10．封片：上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡。 结果判断： 镜下观察：尼氏小体呈蓝紫色。 四．0.4%焦油紫的配置：0.2g焦油紫溶于50ml双蒸水中，滴加0.4ml冰醋酸，pH调至3-4之间，过滤； 五．注意事项：1．染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同