DAPI和Hoechst-PI染料.docVIP

DAPI DAPI即4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。 DAPI介绍 在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在500nm左右。 DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。 DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。 中文名：4，6-联脒-2-苯基吲哚(?) 英文名：4,6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride 分子式：C16H15N5 分子量：277.324 CAS number：28718-90-3 光谱性质： DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm 与双链DNA结合时最大吸收/最大发射为358 nm/461 nm；与RNA结合时，最大发射移动到400 nm左右。 DAPI染色原理： DAPI 为一种 HYPERLINK /view/1356988.htm \t _blank 荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察 HYPERLINK /view/1555642.htm \t _blank 细胞标记的效率高(几乎为100 %) 。DAPI染色常用于 HYPERLINK /view/24139.htm \t _blank 细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或 HYPERLINK /view/87884.htm \t _blank 流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到细胞核的形态变化。 a、 正常的烟草细胞核：核形完整，染色质均匀。 b、 HYPERLINK /view/179067.htm \t _blank 染色质固缩，向外周聚集，形成周边化。 c、 染色质进一步固缩，形成很多 HYPERLINK /view/6468799.htm \t _blank 颗粒物质。 d、 细胞核破裂形成碎片，核解体。 染色步骤： 在细胞移植前，将DAPI 以一定的浓度加入培养基中，与细胞共同孵育过夜，用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI，再用酶消化后离心收集细胞，加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。 存储条件：-20℃避光保存 每次使用，用量较少，可反复冻融，无需分装 注意事项： 1、DAPI强烈致癌，操作时要戴上手套。 2、贮存液用70%酒精配制，浓度100 μg/ml，可用黑纸包住，长期冻存。使用液按1:1000用PBS稀释，最终浓度100 ng/ml。 3、DAPI是非常优秀的DNA染料，固定过和没有固定过的活细胞均可用DAPI染色。 Hoechest 染色 三种染料都可在350nm左右的 HYPERLINK /view/485023.htm \t _blank 紫外光激发。都在461nm处发出蓝靛色荧光。未被结合的染料最大发射光在510到540nm之间。可被氙-氩灯或水银-氩灯或紫外激光激发。激发光和发射光之间的 HYPERLINK /view/162847.htm \t _blank 斯托克斯位移巨大，故可用于多染料多颜色荧光染色。Hoechst染料的荧光强度随着溶液pH升高而增强。 Hoechst染料溶于水和有机溶剂，如 HYPERLINK /view/218584.htm \t _blank 二甲基甲酰胺或 HYPERLINK /view/43063.htm \t _blank 二甲基亚砜。浓度可高达10mg/mL.水溶液可在4 °C避光保存至少6个月。长期储存于≤-20 °C Hoechst与DNA HYPERLINK /view/3851898.htm \t _blank 双链中的