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蟾酥脂质微球注射液体内分析方法的建立 蟾酥脂质微球注射液是以蟾酥脂溶性有效成分——蟾毒灵、华蟾毒和脂蟾毒配基为活性成分，采用高压均质法制备出的一种抗癌镇痛药物新剂型。我们以各种稳定性参数为指标，对制剂制备过程中工艺及处方因素进行了研究，并由以上考察结果确定了制剂最终处方及制备工艺。 药物动力学研究已是新药研究中必须研究的项目之一，我国和国外的新药研究指导原则都明确地提出了新药的药物动力学研究的技术要求。 本研究建立了蟾酥脂质微球注射液指标成分——蟾毒灵、华蟾毒和脂蟾毒配基的UPLC/MS/MS法大鼠体内测定方法，为今后考察蟾酥脂质微球注射液在大鼠体内的药代动力学及组织分布过程奠定基础。 R 华蟾毒配基 OCOCH3 (Cinobufagin, C) 脂蟾毒配基 H (resibufogenin, R) 采用GC/MS或LC/MS法进行定量分析时，理想的内标物为待测组分的同位素标记物，但同位素标记的内标物合成难度较大，成本较高，一般不易获得。由于仪器波动，碰撞能量在一天当中有所变化，从而导致待测物与内标质谱信号强度的比值发生改变，结果就是QC样品的日内偏差较大。因此，对内标的要求是：当碰撞能量变化而导致组分的信号强度发生改变时，内标物与待测物变化的趋势应基本一致。实验中选择苯海拉明为内标，可以满足上述要求，重现性良好。 复溶溶剂：在样品复溶时，一般建议使用初始比例的流动相以免使被分析物色谱带展宽。然而蟾毒配基的亲水性较差，为了使挥干的样品完全溶解以增强蟾毒配基的响应信号，复溶时使用的溶剂为乙腈：水（55：45，v/v）,实验结果表明这个比例的溶剂复溶时，被分析物的峰形也较好。 进样体积：进样体积对谱带展宽也有一定的影响，进样体积大于5 μL时，峰形较差。 建立了同时测定血浆中蟾毒灵、华蟾毒和脂蟾毒配基的UPLC/MS/MS方法。UPLC/MS/MS具有多通道检测功能，允许同时对多个成分进行定性、定量分析；不需要使分析物之间实现完全的色谱分离，使得样品预处理过程简化，同时分析测试时间大为缩短。UPLC/MS/MS法具有高度的专属性和灵敏度、具有快速的分析样品的特征，非常适用于血浆样品多种组分的同时定量分析。该法测定三种蟾毒配基的线性范围均为1-400.0 ng/mL，方法的准确度和精密度均符合要求。该法操作简便、快速，每一样品的分离时间仅为3.0 min，每天可处理 120 多个血浆样品。可以将该法用于蟾酥脂质微球注射液的大鼠体内药物动力学及组织分布研究。 分子离子峰及子离子在图1都可以看出。 数据是采用MasslynxTM NT4.1软件(Waters Corp., Milford, MA, USA)以棒图的模式记录的。 血浆样品的处理过程是采用液液提取的方式进行的 配置不同浓度的血浆样品，记录色谱图；以待测物浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用加权（W=1/x2）最小二乘法进行回归运算[3]，求得的直线回归方程即为标准曲线 每天做一条 每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算回收率 * Shenyang Pharmaceutical University 姓 名：翁 琰 专 业：药剂学 导 师：唐 星 教授 研究背景 研究背景 主要抗癌有效成分 蟾毒灵 蟾酥脂质微球注射液 脂蟾毒配基 UPLC-MS/MS 大鼠体内药物动力学 华蟾毒配基 建立了三种成分的UPLC-MS/MS体内分析方法 研究内容 实验仪器 实验仪器 蟾毒灵 (Bufalin, B) 蟾毒配基以环戊烷并全氢菲（甾核）为基本骨架，C3位有羟基，C17位连有α-吡喃酮环。 化合物结构 UPLC-MS实验条件 色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLCTM BEH C18柱（2.1mm×50 mm，1.7 μm）流速为0.2 ml·min-1；柱温35℃，进样室温度:4 ℃ 进样量:5 μL 。 UPLC-MS实验条件 UPLC-MS实验条件 UPLC-MS实验条件 C B R I.S. 质谱条件：采用电喷雾电离源（ESI），多重反应监测（MRM） 进行定量分析，二级锥孔电压：2.0 V，毛细管电压：3.8 kv， RF电压：0.1 v，离子源温度：120 ?C，脱溶剂气温度：400 ?C， 脱溶剂气流速： 500 L/hr，锥孔反吹气流速：50 L/hr。 UPLC-MS实验条件 UPLC-MS实验条件 UPLC-MS实验条件 UPLC-MS实验条件 UPLC-MS实验条件 肝素抗凝血浆 200 ?L 内标溶