临床分子诊断应用发展和趋势.pptVIP

临床分子诊断应用的进展和趋势 卫生部临床检验中心 李金明 分子诊断技术 以DNA、RNA或蛋白为靶标，通过检测基因的存在、变异或表达从而为疾病的临床诊断提供直接和科学信息的技术。如分子杂交技术、PCR技术、测序技术、凝胶电泳技术、免疫测定技术等。 基因：除了蛋白质或某些RNA的编码区外，还包括为获得一个特异性产物所必需的相关序列。 几个里程碑 1953年:DNA双股螺旋的发现 1963年:放射免疫测定技术、核酸测序方法 1972~1973年:重组DNA技术 1983年:PCR测定技术 1991年:实时荧光PCR技术和芯片技术 2000~年：纳米和量子标记技术？ 核酸研究的历史 1953 沃森和克里克（WATSON，CRICK）-DNA双螺旋 核酸研究的历史 1960年代中期 桑格(Sanger)的DNA测序法 核酸研究的历史 1983 穆利斯（Kary Mullis) –PCR技术 1990 Human Genome Project 后基因组时代--基因组学 功能基因组学 研究的核心问题有：基因组的多样性（SNP、药物基因组学）；基因组的表达及其时空调节（基因芯片、微量RNA探针、蛋白质组学）；模式生物基因组研究（基因剔除）等 后基因组时代--基因组学 结构基因组学 结构基因组学，是由结构生物学与功能基因组学紧密结合所产生的，其科学目标就是要规模化地测定蛋白质、RNA及其它生物大分子的三维结构。 临床PCR检验的国内外现状 国外以前应用相对较少,主要为ROCHE的COBAS AMPLICOR 国内从2002年开始规范化应用,以实时荧光PCR为主 在感染性疾病病原体检测中的应用 病毒的检测 定量 定性 基因型及基因突变 细菌及其它微生物的检测 难培养菌 耐药基因 寄生虫的检测 在遗传病及其它基因相关疾病诊断中的应用 α地贫 β地贫 血友病 药物性耳聋 在亲子鉴定中的应用 每个人的遗传物质一半来自父亲，另一半则来自母亲。根据孟德尔遗传分离和自由组合定律，亲代基因型决定子代基因型，在没有基因突变和分型错误的前提下，孩子不可能带有双亲均没有的等位基因。 父系遗传的Y染色体的标记，子代的分型必定与父亲的相同，而且同一父系的所有个体的分型一致。母系遗传的线粒体DNA，子代的分型与母亲的分型一致，并且同一母系的所有个体的分型一致。 在亲子鉴定中的应用 父与子之间仅有一个遗传标志不符合遗传规律尚不能排除亲子关系，因为有可能是突变所致。必须有2个以上不同基因座同时不符才能否定其亲子关系。 亲子鉴定的手段主要有两大类: (1)血液中各种抗原成分的遗传多态性标志物检验,如人类白细胞抗原分型、红细胞抗原分型、红细胞酶型及血清型；（2）DNA多态性检验。主要包括有单基因座探针限制性片段长度多态性（DNA指纹）和单基因座扩增片段长度多态性（包括用多聚酶链反应(PCR) 检测的可变数目串联重复多态性(VNTR)和短串联重复多态性(STR)）。  在亲子鉴定中的应用 DNA多态性检验是目前亲子鉴定中最准确的一种方法。 如果孩子和被测试男子的DNA模式在两个或多个DNA探针上不吻合,那么被测试男子便被100%排除,即他是亲生父亲的可能性是0%。反之，如果孩子和被测试父亲的DNA模式完全吻合,则在理论上不能100%肯定其为亲生父亲，只能计算出99.95%或更大的概率。 事实上也发生过DNA模式完全吻合但实际并非为生父的情况，但这种情况的可能性极低。 在个体鉴别中的应用 基因指纹又称DNA指纹，指的单基因座探针限制性片段长度多态性。DNA所含有的遗传信息是由遗传密码字母A、C、G和T的序列决定的。人类含有总数约30亿个这种字母，它们在人体每个细胞的染色体上都以一定的次序排列，排列次序的不同使得一个个体与另一个个体完全不同。个体间的亲缘关系相距越远，基因组的核苷酸字母排列差异就越大。相反，遗传上相关的个体（如同胞、父子）相应地在其字母序列上有很大的相似性。 在个体鉴别中的应用 DNA指纹就是通过分析这种差异来确定个体。 DNA指纹是最可靠的个体确认方法，现已在司法实践中广泛应用，有很多案例的唯一证据就是留在现场的这些藏在细胞内的DNA。 在恶性肿瘤诊断中的应用 肿瘤诊断 肿瘤疗效观察 肿瘤的转移 在血液筛检中的应用 HCV和HIV感染“窗口期” HBV DNA PCR检测筛检血液的意义 其 它 Immuno-PCR 临床分子诊断的标准化 方法试剂的标准化 核酸提取 “内标”(Internal control)的应用 工作程序的标准化 标本采集、运送、管理、检测、质量控制、结果报告和解释 标准物质的研究 临床分子诊断应用的发展趋势