几种常用的染色方法.docVIP

几种常用的1．美蓝染色法??? 在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法?? （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。 （2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。 （3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。 （4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。 （5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 3．抗酸性染色法 （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。 （2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。 （3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。 （4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。 以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。 对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法 （1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。 （2）另一方法? 抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法 （1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。 （2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法 （1）染色液配制 ①美蓝溶液? 美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ?②碱性复红溶液? 碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 （2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ?③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。 ?7.结晶紫福尔马林荚膜染色法 ?（1）染色配制 ?①结晶紫福尔马林染色液? 结晶紫10g，福尔马林溶液100ml。混合使其完全溶解，隔夜过滤。 ②碱性复红溶液? 见前：克利特氏荚膜染色法 （2）染色法 ①涂片用结晶紫福尔马林染色液染色0.5—1min。 ?②水洗后，以碱性复红染色液复染15—30s。 ?③水洗、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈深蓝色，荚膜呈淡红色。 ?8.番红染色液荚膜染色法 ?（1）染液配制? 番红（或沙黄）0.7g，95％酒精20ml，蒸馏水15ml。 ?将番红溶解于酒精内，再加蒸馏水混合而成。 （2）染色法 ①涂片滴加番红染色液，将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。 ?②水洗、吸干、镜检。 ③染色后，菌体呈暗红色，荚膜呈淡黄色。 ?9.赫斯氏荚膜染色法 ?（1）染色液配制? ?①龙胆紫酒精溶液?? 龙胆紫酒精饱和液5ml，蒸馏水95ml。 ?②硫酸铜水溶液?? 硫酸铜20g，蒸馏水100ml。 ?（2）染色法 ?①涂片加热固定，将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。 ?②用硫酸铜液代替水冲洗染液，用吸水纸吸干、镜检。 ?③染色后，菌体呈深紫色，荚膜呈浅蓝色。 ?10．安沙尼氏荚膜染色法 ?（1）染色液配制 ①1％结晶紫水溶液。 ②20％硫酸铜水溶液。 ?（2）染色法 ①将涂片在空气中自然干燥。 ?②以1％结晶紫水溶液染色2min（不必加热），再以20％硫酸铜代水冲洗染液。 ③吸干、镜检。 ?④染色后，菌体呈紫色，荚膜呈淡紫色。 ?11．苗列尔氏芽孢染色法 ?（1）染色液配制? ①媒染液? 5％铬酸液（铬酸5ml，加蒸馏水95ml） ?②染色液? 石炭酸复红液 ?③脱色液? 2％硫酸液（纯硫酸2ml，加蒸馏水98ml） ④复染液 碱性美蓝 （