血清总胆固醇的测定(胆固醇氧化酶法)课件.ppt

* 主讲人：刘杰 同组人（刘杰、杨宇光、陈琪、刘婷婷） 我们为什么要做这个实验呢？ 化验介绍：血清胆固醇是血脂的成分之一，正常人体含胆固醇2g/kg体重。血清胆固醇和甘油三脂升高与动脉硬化有一定的关系，所以在防治冠心病时了解血酯的变化水平，有一定的实际意义。 临床意义 （1）总胆固醇增高：常见于动脉粥样硬化，原发性高血脂症（如家族性高胆固醇血症，混合型高脂蛋白血症），糖尿病，肾病综合征，总胆管阻塞，老年性白内障和牛皮藓 （2）总胆固醇降低：常见于低脂蛋白血症，贫血，败血症，甲状腺功能亢进，肝疾病，严重感染，癌症晚期等。 动脉粥样硬化 原发性高血脂症 贫血 实验目的 掌握血清总胆固醇测定的方法（酶法）与临床意义 血清中总胆固醇 游离胆固醇 游离脂肪酸 低密度脂蛋白高密度脂蛋白,极低密度脂蛋白乳糜微粒 测定方法 化学法:抽提,皂化,毛地黄皂苷沉淀纯化,显色与比色 酶法:临床上常用胆固醇氧化酶法 抽提法 直接测定法 前言 血清中总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯两部分，其中低密度脂蛋白中含量最多，其次是高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白，乳糜微粒中含量最少。血清总胆固醇测定方法分化学法和酶法。化学法一般包括抽提，皂化，毛地黄皂苷沉淀纯化，显色与比色五个阶段。目前临床上常用的是胆固醇氧化酶法 化学法的种类很多，由于显色反应的特异性不同，其结果有一定的差异。 化学测定法（公认） Abell-Kendall(L-B反应)法 三氯化铁-硫酸反应法（Zak法） 显色稳定 操作简便 灵敏度约5倍于L-B反应法 胆固醇酯与游离胆固醇显色程度比较接近 特异性差，干扰因素比L-B法多 。Zak法更适合于科研使用 。 胆固醇酯+H2O 胆固醇+脂肪酸 胆固醇+1/2O2+H2O -胆甾烯-3-酮+H2O2 2H2O2+4-氨基安替比林+酚 醌亚胺+4H2O 胆固醇酯酶 胆固醇氧化酶 过氧化物酶 4 实验原理 血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸，游离胆固醇在胆固醇氧化酶的作用下生成和过氧化氢,过氧化氢在4-氨基安替比邻和酚存在时,经过氧化物酶催化,反应生成红色醌类化合物,其颜色深浅与标本中TC含量成正比。上述三种酶的催化作用成连锁反应，实验中把三种酶按比例混合在一起，便于使用。本方法特异性好，灵敏度高，既可以运用需手工操作，也可进行自动化分析。 实验试剂 （1）基础液：100ml0.1mol/l磷酸缓冲液（pH=6.7）(含胆酸钠129mg),4-氨基安替比林16mg，苯酚132mg，TritonX-100 0.2ml （2）酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固醇酯酶，胆固醇氧化酶和过氧化物酶）合剂1ml,加基础液30ml，混匀即得。 （3）胆固醇标准液（5.17mmol/l）:精确称取胆固醇200mg，用纯无水乙醇溶解，用乙醇定容至100ml，分装，4摄氏度保存，临用时取出。