Down-Regulation of ATP-Binding Cassette C2 Protein Expression in HepG2 Mediated by MicroRNA-379课件.ppt

* Down-Regulation of ATP-Binding Cassette C2 Protein Expression in HepG2 Cells after Rifampicin Treatment Is Mediated by MicroRNA-379 IF:4883 主要内容 摘要 简介 实验步骤 结果分析 讨论 摘要 miRNAs通过对3’末端的干扰作用于后转录过程，被证实对ATP结合盒（ABC）膜转运蛋白有调节作用。本研究的目的是探索ABCC2，一种重要的物质交换的转运子，是否是miRNA介导的后转录过程的基因调节子。用5uM的利福平作用HepG2细胞48h，检测了其中377中miRNA的表达水平。检测了利福平作用72h的特殊miRNA,ABCC2 mRNA和蛋白的表达。功能的得失实验和报告基因的检测提供了有力的证据。在肿瘤细胞中miRNA-379作为主要的miRNA作用于ABCC2 mRNA。ABCC2 mRNA有明显的增加，在24h达到最大增加倍数1.56（+-）0.43.除此之外，miRNA-379增加（48h达到最大值4.10倍），而ABCC2蛋白72h下降的幅度最大约0.47倍左右。相反的是，利福平处理细胞48h后，注入miRNA-379抑制剂能够引起ABCC2蛋白表达的一个上升。我们确定了一种miRNA能够在后转录水平上下调ABCC2的表达水平，证实了在HepG2细胞中，这种miRNA阻碍了PXR介导的末端转录刺激引起的ABCC2过表达。 简介 MicroRNAs,通过对3’-URT干扰作用于后转录过程，被证实涉及ABC膜转运蛋白的调节。在癌细胞株中，miRNA-451和miRNA-326能够下调ABCB1和ABCC1。miR-328和miR-519c影响后转录中ABCG2的表达。这些miRNA的修复性表达或许是抗癌药物抵抗癌症的一种机制。至今，没有实验数据可以证明miroRNA对ABCC2（另一种重要的膜运输蛋白）的调节作用机制。这些转运子不仅可以消耗外源性成份还可以介入到内源性物质的偶联和解耦联作用。本研究的目的是确定以ABCC2 3’端为靶目标的ｍｉＲＮＡ，并且确定他们对ＡＢＣＣ２蛋白表达的影响。 　基于ＡＢＣＣ２转录过程会改变以ＡＢＣＣ２为靶目标的ＭｉＲＮＡｓ的表达的假说，我们检测用利福平或其他的 结果分析 利福平能够撤销细胞对miRNA的表达的管制作用； 利福平对ABCC2和miR-379的作用效果呈现时间依赖性； 利福平能够诱导ABCB1蛋白表达； miR-379对ABCC2在mRNA和蛋白水平上的影响； ABCC2 3’-UTR作为miR-379的靶目标； miR-379和利福平在ABCC2蛋白表达方面的相互作用。 结果一 利福平能够撤销细胞对miRNA的表达的管制作用 结果二 利福平对ABCC2和miR-379的作用效果呈现时间依赖性 结果三 利福平能够诱导ABCB1蛋白表达 结果四 miR-379对ABCC2在mRNA和蛋白水平上的影响 结果五 ABCC2 3’-UTR作为miR-379的靶目标 *