实验2紫外性能和实验3奎尼丁荧...课件.ppt

上次实验情况;实验二、分光光度计的性能检查 实验三、荧光法测定硫酸奎尼丁 含量 ;实验二、分光光度计的性能检查;中国药典对紫外仪的性能测试要求： 波长精度（氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正 ） 吸收度准确性——用重铬酸钾的硫酸溶液检定 ? 杂散光检查 ——指一些不在谱带范围内且与所需波长较远的光（来源于仪器的瑕疵和使用保养不善）。用碘化钠和亚硝酸钠溶液检定?;实验内容 吸收度的准确度：取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg(实际50.0mg)，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000mL，在规定的波长处测定（先进行扫描得到波峰和波谷的波长），计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。;紫外-可见分光光度仪的进展： 仪器型号：72型，721型，722型，普析1800型 ，普析1810型，普析1901型 仪器性能： 如单光束与双光束的区别； 单波长读数与连续波长扫描的差别； 按扭操作与电脑软件控制等。;扇面镜;特点：有两个单色器，利用吸光度差值定量，消除干扰和吸收池不匹配引起的误差。;注意事项 石英比色皿，取用时应拿取毛面，外壁用擦镜纸轻轻擦拭，不能用硬的滤纸擦，溶液装2/3高度即可，用后及时冲洗，内壁若挂水，用洗液浸泡去污。 吸光度测定时应先用空白溶剂校零，扫描时应先用空白溶剂进行基线校正。 ;实验安排 32人分2组，每2人1台紫外分光光度仪；本周16人做紫外分析(洗玻板，3块/2人)，16人做荧光分析，下周交换。 实验报告格式要求：实验题目（内容），目的要求，实验原理，所用仪器，操作方法简述，测定结果与结论，讨论（对实验成败原因的分析，注意问题，个人感想与体会等）。 报告要求当天交（药典规定的仪器性能参数见补充讲义）。;实验三、荧光法测定硫酸奎尼丁含量;掌握荧光物质的激发光谱与发射光谱的概念与测定方法；;记录仪;激发光谱和荧光光谱的特征与测定方法，?ex和?em的意义与确定方法。;标准曲线：精密称取对照品13.0mg →100.0ml，精密吸取10ml→500.0ml (2.6ug/ml)（已做） 精密吸取(2.6ug/ml)标准液1，3，5ml，分别置25ml容量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液稀释至???度，摇匀。作为对照液（测定时从低浓度开始至高浓度）。 供试液配制：精密称取硫酸奎尼丁80.0mg →100.0ml，精密吸取10ml→500.0ml (16.0ug/ml)（理论值，已做） 精密吸取16.0 ug/ml样品液1ml，置50ml量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试液。;先进行荧光扫描，确定?ex和?em。 激发光谱：固定荧光波长430nm，扫描250-400nm，获得?ex≈350nm(实测值) 发射光谱：固定激发波长(实测值) ，扫描400-600nm，获得?em≈449nm(实测值) 荧光测定：在实测?ex和?em条件下测定空白、标准曲线（低→高浓度）、样品（荧光杯必须洗净）。 每个测定溶液读数3次。;根据读数和标准液浓度绘制标准曲线 计算样品液浓度C样，然后计算硫酸奎尼丁百分含量： %= ×100%。 注意事项： 容量仪器的准确操作； 荧光比色皿的拿取、使用、洗涤注意点； 荧光测定时应先用空白溶剂校零，标准与样品为相同溶剂时，校零只做1次即可。;注意事项;实验安排 32人分2大组，每4人1台荧光分光光度仪，配3个标准溶液和1个样品溶液。 本周16人做荧光分析，16人做紫外分析，下周交换。 实验报告要求：同紫外仪性能测定