蛋白质1-1课件.ppt

（2）与亚硝酸的反应 在标准条件下测定生成的N2体积，即可计算出氨基酸的量。 用途：范斯莱克（Van Slyke）法测定氨基氮的基础。可用于氨基酸定量和蛋白质水解程度的测定。 （3）与2，4-二硝基氟苯（DNFB）的反应 －－烃基化反应 OH- 2，4-二硝基苯氨基酸，黄色 （DNP-氨基酸，可用乙醚抽提） 多肽或蛋白质N端氨基酸的α-氨基也能与DNFB反应，生成DNP-多肽或DNP-蛋白质。后者用酸水解时，所有肽键被打开，可得到黄色的DNP-氨基酸。 该反应由F. Sanger（英）首先发现，并用于鉴定多肽或蛋白质的N-端氨基酸，阐明了胰岛素的一级结构。（故DNFB亦称作Sanger试剂） －－蛋白质N端氨基酸测定的方法之一 （4）与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应－烃基化反应 pH 8.3 苯氨基硫甲酰氨基酸 （PTC-氨基酸，无色） 无水HF 苯硫乙内酰脲氨基酸（PTH-氨基酸,无色,可用乙酸乙酯抽提） Edman（瑞典）首先使用该反应鉴定多肽或蛋白质的N-端氨基酸。蛋白质多肽链N端氨基酸的α-氨基可与PITC反应生成PTC-蛋白质，在酸性溶液中，它释放出末端的PTH氨基酸和比原来少了一个氨基酸残基的多肽链——称为Edman降解反应。（故PITC亦称作Edman试剂）。 该反应在多肽和蛋白质的氨基酸序列分析方面占有重要地位－－多肽顺序自动分析仪，一次可连续测出60个以上的氨基酸顺序。 （5）与荧光胺反应 荧光胺 荧光产物 荧光产物激发波长 λx = 390 nm , 发射波长 λM = 475 nm , 该反应非常灵敏（1ng），可根据荧光强度εM测定氨基酸含量 （6）与酰化试剂反应 用途：在多肽和蛋白质的人工合成中被用作氨基保护试剂以及肽链的氨基端测定等。 与酰氯或酸酐在弱碱溶液中作用时，氨基被酰基化。 5-二甲氨基萘磺酰氯代替DNFB试剂 pH 9.7 40℃ 5-二甲氨基萘磺酰氨基酸有强烈的荧光，可用荧光光度计快速检出，灵敏度高。 5-二甲氨基萘磺酰氯简称丹磺酰氯或DNS-Cl。 （7）形成西佛碱反应 西佛碱是以氨基酸为底物的某些酶促反应如转氨基反应的中间物。 氨基酸的α-氨基能与醛类化合物反应生成弱碱，即所谓西佛碱（Schiff’s base）。 （8）脱氨基反应 经相应的氨基酸氧化酶、转氨酶催化的反应。 2、α-羧基参加的反应 （1）成盐和成酯反应 干燥，HCl 回流 该反应使氨基酸的氨基被活化 （2）成酰氯反应 这个反应使氨基酸的羧基活化——合成多肽 （苄氧甲酰基） （3）脱羧基反应 （4）叠氮反应 NH2NH2 此反应使氨基酸的羧基活化。氨基酸叠氮化合物常用于肽的人工合成 酰化氨基酸甲酯（Y=酰基） 酰化氨基酸酰肼 酰化氨基酸叠氮 3、 α-氨基和α-羧基参加的反应 （1）与茚三酮的反应 茚三酮 水合茚三酮 + 3H20 水合茚三酮(无色) NH3 CO2 RCHO + 还原型茚三酮 (弱酸) 加热 水合茚三酮 + NH3 + 还原型茚三酮 紫色化合物 λmax = 570nm 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质，其余所有的α-氨基酸与茚三酮反应均产生蓝紫色物质。 加热 黄色， λmax =440nm （2）成肽反应 这是多肽和蛋白质生物合成的基本反应。 （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） 结构式 （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） （CHNH2-COOH） 三个有特性的氨基酸 一是脯氨酸（Pro），因为它是一个环状的亚 氨基酸。它的氨基和其它氨基酸的羧基形成的 肽键有明显的特点，较易变成顺式肽键。 二是甘氨酸（Gly），它是唯一的在α－碳原子上只有两个氢原子，没有侧链的氨基酸。为此它既不能和其它残基的侧链相互作用，也不产生任何位阻现象，进而在蛋白质的立体结构形成中有其特定的作用。 第三个是半胱氨酸(Cys)。它的个性不仅表现在其侧链有一定的大小和具有高度的化学反应活性，还在于两个 Cys 能形成稳定的带有二硫（桥）键的胱氨酸。二硫键不仅可以在肽链内，也可以在肽链间存在。更有甚者，同样的一对二硫键能具有不同的空间取向。 （浙江大学2006年