血清总胆红素及结合胆红素测定课件.ppt

血清总胆红素及结合胆红素测定 Ⅰ 重氮反应法测定总胆红素和结合胆红素 【实验原理】  血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素；非结合胆红素须有加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠作用，其分子内氢键破坏后才能与重氮试剂反应，也产生偶氮胆红素。本法重氮反应pH6.5，最后加入碱性酒石酸钠使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色，使检测灵敏度提高。 【检验原理】 总胆红素在pH3.0附近，在钒酸盐和表面活性剂存在下，可以被氧化成胆绿素。与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。测定胆红素氧化前后吸光度的差，可以计算出样品中总胆红素的浓度。 【试剂】 1．咖啡因-苯甲酸钠试剂 2．碱性酒石酸钠溶液 3．72.5mmol/L亚硝酸钠溶液 4．28.9mmol/L对氨基苯磺酸溶液 5．重氮试剂 6．5.0g/L叠氮钠溶液。 7．胆红素标准液 2.标准曲线制作 取5支试管，分别编号，然后按表稀释胆红素储存液配制胆红素标准液。 混匀(不可产生气泡)，按总胆红素测定法操作。每一浓度作3个平行管，并分别做标准对照管，用各自的标准对照管调零，读取标准管的吸光度。配制标准液用的溶剂血清中尚有少量胆红素，同样测定后得一吸光度值。每个标准管的吸光度值均应减去此吸光度，然后与相应胆红素浓度绘制标准曲线 【参考范围】 血清总胆红素：5.1～19μmol/L(0.3～1.1mg/dl)； 血清结合胆红素：1.7～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dl)。 【临床意义】 1．血清总胆红素测定的意义 (1) 有无黄疸及黄疸程度的鉴别。 (2) 肝细胞损害程度和预后的判断 胆红素浓度明显升高反映有严重的肝细胞损害。但某些疾病如胆汁淤积型肝炎时，尽管肝细胞受累较轻，血清胆红素却可升高。 (3) 新生儿溶血症 血清胆红素有助于了解疾病严重程度。 (4) 再生障碍性贫血及数种继发性贫血(主要见于癌或慢性肾炎引起)，血清总胆红素减少。 2．血清结合胆红素测定的意义 结合胆红素与总胆红素的比值可用于鉴别黄疸类型。 (1) 比值＜20% 溶血性黄疸，阵发性血红蛋白尿，恶性贫血，红细胞增多症等。 (2) 比值40%～60% 肝细胞性黄疸。 (3) 比值＞60% 阻塞性黄疸。 但以上几类黄疸，尤其是(2)、(3)类之间有重叠。 【临床意义】 谁是动名词？ doing Ⅱ胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素 【原理】 胆红素呈黄色，在450nm附近有最大吸收峰。胆红素氧化酶(BOD)催化胆红素氧化，随着胆红素被氧化，A450nm下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。在pH8.0条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测450nm吸光度的下降值可反映总胆红素含量；加入SDS及胆酸钠等阴离子表面活性剂可促进其氧化。 在pH3.7～4.5缓冲液中，BOD催化单葡萄糖醛酸胆红素(mBc)、双葡萄糖醛酸胆红素(dBc)及大部分δ胆红素氧化，非结合胆红素(Bu)在此pH条件下不被氧化。用配制于人血清中的二牛磺酸胆红素(ditaurobilirubin，DTB)作标准品，检测此条件下450nm吸光度的下降值可反映结合胆红素的含量。 * *