第六章黄酮课件.ppt

（一）溶剂提取法 1、乙醇或甲醇提取： 浓缩提取液得浸膏，加水分散，用乙醚萃取得苷元（游离黄酮），再用乙酸乙酯或正丁醇萃取得黄酮苷。 2、热水提取： 仅用于提取黄酮苷类，冷后苷类沉淀析出。 除杂：石油醚除去叶绿素，胡萝卜素等脂溶性色 素；水溶液中加入浓醇，除去蛋白质，多 糖 。 3、碱提酸沉法： 常用碱水：石灰水，Na2CO3，稀NaOH，碱性稀醇：5% NaOH的50%乙醇 酸沉：盐酸 注意：酸碱浓度不宜过高（碱性过强，破坏黄酮母核；酸性过强，生成烊盐，影响产率）。 石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质等有利于纯化。但浸出效果不及NaOH ，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。 稀NaOH：浸出效率高，但杂质也多。 二、分离 分离依据：极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。 （一）系统溶剂法： 自浸膏中先用乙醚萃取苷元，再用乙酸乙酯反复萃取苷，最后用正丁醇萃取极性较大的苷。 （二）PH梯度萃取法： 用不同浓度的碱萃取分离。 （三）柱层析法 1、聚酰胺柱层析 （1）吸附原理： 聚酰胺分子中酰胺基与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合而产生吸附作用。 （2）吸附规律： A：与酚羟基的数目有关，酚羟基数目越多，吸附力越强。 B：与酚羟基的位置有关，如果酚羟基所处的位置易于形成分子内氢键，则吸附力减弱。 C：分子内芳香化程度越高，共轭双键越 多，则吸附力越强。 查耳酮二氢黄酮；黄酮二氢黄酮 D：不同类型黄酮被吸附的强弱顺序为： 黄酮醇黄酮二氢黄酮异黄酮。 E：苷元相同时，苷被吸附的强弱顺序为： 苷元单糖苷双糖苷叁糖苷 F：与溶剂介质有关 由弱到强：水甲醇或乙醇丙酮稀氢氧化钠或氨水甲酰胺二甲酰胺尿素水溶液。 注意：聚酰胺层析常常存在流速慢及低分子杂质混入的问题。通常可通过预先过筛除去细粉或与硅藻土混合制粒；而低分子杂质的干扰，可在装柱时用5%甲醇或10%盐酸预洗除去。 （3）色谱行为： 以含水系统（如甲醇-水）作洗脱剂，则苷比苷元先洗脱下来——反相色谱。 用有机溶剂（如氯仿-甲醇）作洗脱剂，则苷元比苷先洗脱下来——正相色谱。 因为聚酰胺具有双重色谱性能，分子中既有非极性的脂肪键，又有极性的酰胺基团。 2、硅胶柱层析 适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类。 （1）分离苷元时： 用氯仿-甲醇混合溶剂洗脱。 （2）分离苷时： 用氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水洗脱。 3、葡聚糖凝胶色谱法 （1）凝胶类型：Sephadex LH-20常用，甲醇、甲醇-水洗脱。 （2）分离苷元时：利用吸附作用，游离酚羟基数目越多，则吸附力越强，越难洗脱。 （3）分离苷时：主要靠分子筛作用，洗脱时按苷分子量由大到小的顺序依次被洗脱出来。 （4）洗脱下来的先后顺序为： 叁糖苷，双糖苷，单糖苷，二羟基苷元，三羟基苷元，四羟基苷元，五羟基苷元，六羟基苷元 例如： Sephadex LH-20柱上，甲醇对下列化合物洗脱顺序为： 黄酮类化合物 取代基 Ve/Vo 芹菜素 5，7，4‘-三羟基 5.3 木犀草素 5，7，3‘，4’-四羟基 6.3 槲皮素 3，5，7，3‘，4’-五羟基 8.3 杨梅素 3，5，7，3‘，4’，5‘-六羟基 9.2 山柰酚-3-鼠李糖基 三糖苷 3.3 半乳糖-7-鼠李糖苷 槲皮素-3-芸香糖苷 双糖苷 4.0 槲皮素-3-鼠李糖苷 单糖苷 4.9 4、高效液相色谱法 常用反相色谱柱，用甲醇-水-甲酸系统或乙腈-水-甲酸系统洗脱。 6.5 实例：黄芩、槐米 一、黄芩 [来源] 唇形科黄芩的干燥根。 [功效] 清热燥湿、泻火解毒、止血安胎。 [成分] 主要含黄酮类成分，另有氨基酸、挥发油、糖和甾醇。 （一）主成分的结构与性质 有30多种黄