实验 硫酸铵分级沉淀分离苯丙氨酸解氨酶课件.ppt

实验（一）硫酸铵分级沉淀分离苯丙 氨酸解氨酶（8学时）;一、实验背景;二、实验原理;分级沉淀： 不同盐浓度下各种蛋白质的溶解度是不同的，因此调节溶液的盐浓度可使各种蛋白质先后沉淀出来，或者使需要的酶与其它杂质蛋白分开，达到提纯目的，这就是分级沉淀法。 硫酸铵沉淀一般在蛋白纯化的步骤中前期用，它简便且重复性好，但纯化倍数不高。分级沉淀中需加的固体硫酸铵或饱和硫酸铵溶液的量，可从硫酸铵饱和度量表中查得。;;三、实验试剂;四、实验步骤;实验步骤;（2）将酶液到入烧杯内，烧杯置于冰浴中，然后在边缓慢搅拌下缓慢加入称好的固体硫酸铵（不能有大颗粒，放在研钵中研碎），待全部硫酸铵加入后，再缓慢搅拌20min；;实验步骤;实验步骤;实验步骤;1、PAL总活力计算： 分别算出每ml酶粗提液和沉淀液[1]和[2]中PAL的总活力； 2、算出40~75%硫酸铵沉淀中PAL的回收率： ;下面开始实验！