小鼠胚胎原位杂交课件.ppt

;定义：;应用：; 杂交所需试剂的配置; 杂交前探针长度和固定剂的选择; Solution I: 50% formamide 5X SSC, pH 4.5 ，1% SDS SolutionII:0.5M NaCl ,10mM Tris-HCl, 0.1%Tween-20 SolutionII加RNaseA .目的是消化未杂交上的ＲＮＡ. Solution III: 50% formamide 2X SSC, pH 4.5 Sheep serum: inactivate by heating to 70°C for 30 minutes, store in aliquots at -20°C. 10X TBS (for 1 liter): 80 g NaCl、 2 g KCl 、250 ml 1M Tris-HCl, pH7.5 ;小鼠整体原位杂交所需主要试剂的配置;探针的制备;试剂配置需要注意的事项;;适合做原位杂交的载体;RNA探针的合成及纯化步骤;小鼠胚胎发育过程;杂交前胚胎处理;注意的细节;RNA Whole Mount In Situ Hybridization（一次结果是４天时间）;现在探针和胚胎都已经准备好了，大家跟我一起开始正式做杂交的试验了。;原位杂交现在开始了;在PBT中洗3次，每次5分钟;用2 mg/ml 的甘氨酸 溶液处理10分钟 ;用PBT配置的4%多聚甲醛和 0.2%的戊二醛重新固定20分钟;杂交后清洗及封闭;小鼠胚胎粉的制作;第二天;第三天;第四天;切片;;;;;谢谢