《实验二、培养基的配制、消毒与灭菌》课件.ppt

实验二 培养基的制备 消毒与灭菌 培养基配制实验原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。 培养基配制要素 营养：碳源、氮源、能源、生长因子、水分和无机盐； 适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力； 一定的氧化还原电位； 合适的渗透压。 培养基的分类 根据微生物的种类和实验目的的不同，培养基分类可以按以下方式： 按成分的不同分 按培养基的物理状态分 按培养基的用途分 按照培养基的成分来分 天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质 合成培养基:用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基 半合成培养基:以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基 按照培养基的物理状态 固体培养基：加入凝固剂，如1.5% ~ 2.0%琼脂 半固体培养基：加入少量凝固剂，如 0.2% ~ 0.7%琼脂 液体培养基：不含任何凝固剂 按照培养基的用途分 基础培养基 营养培养基（加富培养基） 鉴别培养基：含有特定化合物或试剂。某种微生物在这种培养基上培养后，它所产生的某种代谢产物与这种特定的化合物或试剂能发生某种明显的特征性反应，根据这一特征性反应可以将某种微生物与他种微生物区别开来。 选择培养基：利用微生物对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入这类物质，抑制不需要的微生物生长，而利用所需分离的微生物生长，从而达到分离或鉴别某种微生物的目的。 培养基灭菌 配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物 微生物生长繁殖： 消耗养分 改变培养的酸碱度 产生毒素或者抑制物 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 应用最广泛的细菌基础培养基，普通培养基 马铃薯培养基（PDA）的制备 用来培养真菌 高氏Ⅰ号培养基的制备 用来培养放线菌 无氮培养基的制备 用来培养固氮菌 豆芽汁培养基的制备 用来培养酵母菌 麦氏（Meclary）培养基的制备 用来培养酵母菌，利于酿酒酵母子囊孢子的形成 LB培养基的制备 用来培养细菌 操作步骤 称量 溶化 补足水分，调pH （过滤） 分装 6. 加塞 7. 包扎 8. 灭菌 9. 搁置斜面 10. 无菌检查 称量药品时，严防药品混杂。称完一种药品后需要将牛角匙洗净、擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。 药品不要弄错。如：K2HPO4和KH2PO4、水合形式和无水形式的化合物要注意分辨。 培养基中多种无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。 对于微量成分，可先配制成高浓度的储备液，按比例换算后再加入。 琼脂溶化过程中，要控制火力并不断搅拌，以免沸腾溢出或琼脂糊底烧焦。 不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基。 调pH值以前，先补足水分。 pH值不要调过头，以免回调影响个离子浓度。 固体分装：不超过试管高度的1/5；不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上以免污染棉塞而引起污染。 配好培养基后要贴上标签，写清培养基类型、组别、配制时间。 消毒与灭菌 消毒是一般指采用物理、化学和生物的方法消除物体的表面病原菌和有害微生物营养体的过程。 灭菌则是指采用物理、化学和生物的方法杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。 在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此对所用器材、培养基和工作场所都要进行严格的消毒和灭菌。 消毒与灭菌方法 加热灭菌 干热灭菌 湿热灭菌 过滤除菌 辐射灭菌 放射线辐照灭菌 紫外线灭菌 化学药品灭菌 干热灭菌 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 干热灭菌有火焰灼烧灭菌和热空气灭菌两种。 高压蒸气灭菌 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀，继续加热。由于水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。 一般培养基在0.1 MPa下，121℃维持15～30 min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。 其原因有三： 一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低； 二是湿热的穿透力比干热大； 三是湿热的蒸气有潜热存在。 1 g水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.26 kJ(千焦)的热量