RNA检测技术在生殖道病原体诊断中应用(检验科2015年).pptVIP

生殖道病原体实验室检测方法 细菌法 免疫法 分子生物学法 培养法 镜检法 抗原抗体检测 DNA检测 RNA检测 方法学 检测方法 检测样本 检测复杂程度 特点 检测项目 细菌法 培养法 细菌培养 分泌物 较复杂，检测过程长 准确率低，易漏检及误检 用于NG/UU/CT/MG检测 形态学法 涂片镜检 分泌物 全手工操作，较复杂 准确率较高，但有漏检 用于NG检测 免疫法 免疫法 胶体金/ 酶联免疫法 分泌物 耗时短，操作简单 准确率低，假阴性问题突出 用于CT检测 分子生物学法 DNA检测 PCR 分泌物 操作较复杂，需有一定经验才能做好检测 准确率相对较高，但存在污染和死亡病原体导致的假阳性问题 用于CT/NG/UU检测 RNA检测 TMA/SAT 尿液和分泌物 耗时耗时短，仪器自动化操作，较简单 检测活体RNA，灵敏度和特异性均很高 欧美国家用于CT/NG/MG检测 常用CT/NG/UU/MG检测方法比较 国外诊疗指南推荐 使用分子检测法诊断生殖道病原体 CT/NG 美国疾控2014版 《CT/NG实验室诊断指南》 Recommendations for the Laboratory-Based Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae. USA CDC. March 2014. Unemo et al. Laboratory diagnosis of sexually transmitted infections, including human immunodeficiency virus, WHO,2013 WHO 2013版 《性传播疾病实验室诊断方法》 WHO性传播疾病实验室诊断指南 利用16S rRNA为靶标的RNA检测技术（TMA），在灵敏度上比PCR要高，它是目前一种灵敏度、特异度均非常高的MG检测技术。 Unemo et al. Laboratory diagnosis of sexually transmitted。a.infections, including human immunodeficiency virus, WHO,2013 WHO明确指出核酸检测法（NAAT）是诊断MG的唯一可行方法;通过RNA检测技术检测生殖支原体比PCR方法要更准确。 核酸检测法（NAAT）是诊断MG的唯一可行方法 WHO推荐用RNA技术检测MG RNA用于临床检验的优势 灵敏度高，不易漏检：RNA 拷贝数≥ DNA拷贝数（ e.g，16s rRNA 104copy/cell ） 与临床相关性好，可以区分“死菌”“活菌”：病原体死亡，RNA很快降解，可进行疗效评估和辅助判愈，减少无效治疗，比如抗生素滥用。 无创取样：尿液检测，显著降低病人的采样痛苦和检测依从性。 不易误检：靶标和扩增产物都是RNA，不易污染，不易出现假阳性。 RNA检测技术 NASBA（Biomerieux）(NA sequence based amplification) TMA（Gen-probe）(Transcription Mediated Amplification) SAT（上海仁度)（Simultaneous Amplification and Testing) SAT技术 SAT与PCR技术原理比较 RT RNA cDNA RT ~1000 copies T7 SAT DNA Taq Taq PCR 30分钟内 扩增1010倍 中国诊疗指南推荐 用SAT诊断生殖道病原体 梅毒、淋病、生殖器疱疹、生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南。 中国疾控中心、中华医学会皮肤性病学分会性病学组。2014。 中国 2014版 《梅毒、淋病、生殖器疱疹、生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南》 CT/NG/UU/MG-SAT 是国内唯一获得CFDA认证的RNA检测试剂 SAT扩增曲线图 （ABI 7500） 阴性结果 阳性结果 以CT-SAT为例 SAT技术可实现尿液检测 样本类型：宫颈拭子、尿液 金华中心医院 浙大医学院附属妇产科医院 临床结果显示拭子和尿液标本检测阳性率基本一致。 郑雅萍 ?袁青 ?陈伟,实时核酸恒温扩增技术在奈瑟菌感染检测中的应用,《浙江实用医学》, 2015年01期? 沙眼衣原体 淋病奈瑟菌 编号 作者 发表时间 研究中心 病例数 项目 灵敏度 特异性 诊断标准 1 王千秋 等 2010 中科院北京协和医学院皮肤 病研究所 205 NG 100% 94.5% PCR 2 顾伟鸣 等 2010 上海市皮肤病性病医院 229 CT 97.1% 100% 培养+PCR 3 高志华 等 2012 东莞市南方医科大学广