PCR技术与肿瘤三项介绍.pptVIP

PCR技术及肿瘤三项应用 主讲人：赵晶晶 2015.7.31 PCR PCR的基本原理 变性,复性,半保留复制 PCR三步曲 变性 90～97℃ 退火 45～55℃ 延伸 72℃左右 聚合酶链式反应： 是一种放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。 循环次数 DNA的链数 1 　 21 2 2 　22 4 3 　 23 8 10 　 210 1024 20 　220 1,048,576 30 230 1,073,741,824 10亿 PCR循环次数与DNA产量关系 PCR特点：高效扩增、忠实复制 实时荧光定量PCR 是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应循环后产物总量的方法。 实现了对DNA模板的定量而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强，能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点 。 荧光定量PCR的临床应用 感染性疾病的诊断 母婴传播的控制与观察 遗传疾病的诊断 肿瘤的诊断 法医学鉴定 个体化用药指导 年龄 老年，儿童，新生儿 性别 体重/身高 合并症 病程 器官功能 肝脏, 肾脏, 心脏 基因型 遗传（占70%） 环境因素 食物 /吸烟 / 合并用药 药物反应 * 预警 遗传相关疾病 疾病相关遗传缺损 药物基因组学 关联分析 药物相关遗传缺损 预防 个体化治疗 HGP启动了个体化医学/基因组医学 治疗方法开发 基因治疗 药物治疗 人基因数：~22,000 潜在药靶：~22,000 现有药靶：~500 * 个体化药物治疗的目的 避免药物不良反应 最大化药物效应 选择有效个体 EGFR基因突变检测 KRAS基因突变检测 BRAF基因突变检测 二氢嘧啶脱氧酶（DPD）基因突变检测 UGT1A1基因多态性检测 PCR技术在肿瘤个性化治疗中的应用 肺癌居于我国恶性肿瘤死亡率之首，每年新增60万患者，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占85%。 EGFR 表皮生长因子受体; 是上皮生长因子细胞增值和信号传导的受体；与肿瘤细胞的增殖，血管生成，肿瘤侵袭，转移及细胞凋亡抑制有关。 KRAS 鼠类肉瘤病毒癌基因；是细胞信号内传导途径中的一种信号传导蛋白；像是体内的一个开关，正常时可以抑制肿瘤细胞生长，一旦突变，就会刺激细胞生长，打乱规律，从而导致肿瘤的发生。 BRAF 是一种癌基因，是EGFR通路中的重要转导因子，参与调控细胞生长，分化和凋亡等多种生理过程。 肿瘤三项 * TK TK 细胞存活 (抗细胞凋亡) PI3-K STAT3 AKT PTEN MEK 基因转录 MAPK 细胞增殖 /分化 化疗/放疗抵抗 血管增生 肿瘤细胞迁移扩散 pY pY RAS RAF SOS GRB2 pY G1 S M G2 非小细胞肺癌(NSCLC) 组织中EGFR高表达； EGFR对肿瘤的增殖、分化、迁移等起重要作用 抑制EGFR活性可阻断下游的信号传导，抑制肿瘤细胞生长、转移和血管增生，促进肿瘤细胞凋亡 表皮生长因子受体（EGFR） 用于检测肺癌、结直肠癌等恶性肿瘤患者肿瘤组织EGFR（表皮生长因子受体）基因的突变情况。 EGFR突变检测可协助医生选择易瑞沙（Iressa，Gefitinib，吉非替尼)、特罗凯（Tarceva，它赛瓦；Erlotinib，厄洛替尼）等靶向药物的有效人群。EGFR突变的患者建议使用该类药物治疗，无突变者不建议使用该类靶向药物。 EGFR基因突变检测是NSCLC靶向用药的必检项目 K-ras基因是编码一个GTP结合蛋白的癌基因，其表达产物是EGFR信号传导通路上的重要蛋白。 K-ras基因突变一般会使结直肠癌和肺癌患者络氨酸激酶抑制剂产生耐药。  判断肿瘤的发生发展、预后以及了解肿瘤的治疗效果： 正常人