根癌农杆菌介导的粳稻遗传转化-Bio-protocol.PDF

/e1010174 DOI:10.21769/BioProtoc.1010174 根癌农杆菌介导的粳稻遗传转化 Agrobacterium-mediated Genetic Transformation of Japonica Rice 陈秋红，陈太钰，林拥军，陈浩* 作物遗传改良国家重点实验室，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：hchen@ 引用格式：陈秋红，陈太钰，林拥军，陈浩. (2018). 农杆菌介导粳稻遗传转化. Bio-101 e1010174. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010174. How to cite: Chen, Q. H., Chen, T. Y., Lin, Y. J. and Chen, H. (2018). Agrobacterium-mediated genetic transformation of japonica rice. Bio- 101 e1010174. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010174. (in Chinese) 实验原理：根癌农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在一定条件下 趋化性地感染植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤。根癌农杆菌中含有Ti 质粒，其上有 一段可转移的DNA （T-DNA）。根癌农杆菌侵染植物细胞后，可将其T-DNA 转移并插入 到植物细胞的基因组中，并稳定地遗传给植物细胞后代。经过人工改造的Ti 质粒可以作 为基因工程载体，将目的基因导入受体植物中。本试验借助根癌农杆菌侵染，将外源基 因导入水稻愈伤组织细胞，然后通过组织培养技术使被转化的水稻愈伤组织细胞分化再 生，从而获得转基因水稻植株。整个试验过程需要4~5 个月时间。 实验目的：将目的基因稳定地转化到粳稻品种(中花11，日本晴等)中表达，从而进行基 因功能研究或者改良农艺性状。 关键词：粳稻，根癌农杆菌介导，遗传转化 材料与试剂 1. 吸水纸 2. 滤纸 3. 无菌大平皿 4. 无菌小平皿 5. 粳稻种子 6. 根癌农杆菌工程菌株EHA105 (携带含目的基因载体) Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010174 DOI:10.21769/BioProtoc.1010174 7. 95% 乙醇 8. 葡萄糖 9. 抗生素 (潮霉素、G418 或除草剂Basta) 10. 封口胶 11. KT (Kinetin) (Sigma, catalog number: K-0753) 12. 6-BA (6-BenzylaminoPurine) (Sigma, catalog number: B-5898) 13. IAA (Indole-3-acetic acid) (Sigma, catalog number: I-5148) 14. NAA (Napthalene acetic acid) (Sigma, catalog number: N-0640) 15. 2,4-D (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) (Sigma, catalog number: D-8407) 16. CH (Casein Enzymatic Hydrolysate) (Sigma, catalog number: C-7290) 17. Kanamycin (USB, catalog number: 17924) 18. Cn (Carbenicillin) (GiBco BRL, catalog number: 10177-012) 19. Hn (hygromycin B) (GiBco BRL, catalog number: 10687-010) 20. AS (Acetosringone) (Aldrich chem., CO 01531 EG) 21. Pyridoxine HCl (Sigma, catalog number: P-8666) 22. Nicotinic acid (Sigma, catalog number: N-0765)