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封闭抗体和反复自然流产相关性分析 　　摘要：目的:了解封闭抗体与反复自然流产的相关性。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测196例不孕不育患者及190例正常孕妇血清封闭抗体。结果:反复自然流产患者封闭抗体阴性率明显高于对照组，差异有统计学意义。结论:封闭抗体缺乏是反复自然流产的重要原因之一。封闭抗体产生不足,使得免疫系统容易对胚胎产生免疫攻击，母体对胎儿产生强烈的排斥相象,怀孕早期可出现自然流产，而且随着流产次数增加，封闭抗体缺乏更明显。 　　关键词：反复自然流产封闭抗体 　　 　　自然流产指妊娠在28w以前自行终止、胎儿体重在1000g以下者， 若连续发生了3次或3次以上的自然流产，可称为反复自然流产（recurentor repetitive spontaneous abortion， RSA），反复自然流产在妇科领域中属常见疾病。反复流产的病因十分复杂，除染色体异常、内分泌失调、生殖结构畸形和感染等原因外，约有60% ～70%原因不明，目前研究认为与免疫因素有关，是母体排斥胎儿的结果[1]。根据免疫病因分类可将RSA分为母-胎免疫识别低下型、母-胎免疫识别过度型、母-胎免疫识别紊乱型，其中，以封闭抗体（Blocking antibody，BA）缺乏为主要特征的母-胎免疫识别低下型最常见。为了解封闭抗体与反复流产关系，我院妇产科门诊应用ELISA对198例反复自然流产患者和190例正常孕妇血清进行封闭抗体检测，现将结果报告如下。 　　1.材料与方法 　　1.1一般资料 所有病例全部来自2002年1月至2008年1月在我院妇产科门诊就诊的RSA患者和正常孕妇，其中反复自然流产患者196例，选190例正常孕妇作为对照组。年龄23～41岁，平均29.5岁，连续自然流产≥3次，均为孕20周内流产，排除了遗传、解剖、内分泌、感染等因素，其配偶精液检查各项参数正常。反复自然流产组中流产次数3次者104例（3次组），流产次数3次以上者92例（＞3次组）。 　　1.2 诊断标准 为既往曾明确诊断为早孕而自然流产的患者，符合诊断标准[2]。 　　1.3 样本采集分别采集患者和正常孕妇静脉血2 ml不抗凝，1小时内分离血清，并灭活补体，待用。 　　1.4酶联免疫检测实验所用酶标仪为博赛2010全自动酶标仪，洗扳机为郑州安图anthos fiuido自动洗扳机。所用试剂由美国莱姆德公司生产，北京索奥生物技术有限公司提供。 　　1.5 封闭抗体检测方法90μl Antibody Diluent加入10μl control serum，摇匀，加入第一行C～H孔，第二行C～E孔，每孔加10μl；每份待检血清取20μl加入Antibody Diluent，摇匀分别加入3～12行A～D孔（每行1人），每孔10μl；37℃孵育45 min；配备1×10Wash buffer，27 ml蒸馏水加入3 ml 1×Wash buffer，摇匀；37℃孵育1 h后扣干，用1×10 Wash buffer洗板两次，扣干； 稀释酶标抗体：取594μl Antibody Diluent加入6μl AlkalinePhoshase Conjugated（此为10人份所需试剂）摇匀;实验孔和对照孔加入已稀释的酶标抗体10μl，37℃孵育30 min；扣干，用1×10 Wash buffer洗板三次，扣干；各取底物A、B各300μl，混匀，加入各孔10μl；避光孵育10 min，加入5μl Stop Reagent终止反应。在已设置好的酶标仪上进行读数。 　　1.6 统计学处理 记数资料采用χ2检验进行统计学分析。 　　2.结果 　　2.1 196例反复自然流产患者中，封闭抗体阴性141例，占71.9%（141/196），封闭抗体阳性55例，占28.1%；对照组190例正常孕妇中，封闭抗体阴性20例，占10.5%（20/190），封闭抗体阳性170例，占89.5%（170/190）。两组封闭抗体缺乏例数进行比较差异有统计学意义（χ2=147，χ20.05（1）=3.84，χ2＞χ20.05（1）P＜0.05）。说明封闭抗体缺乏是反复自然流产的重要原因之一。见表1。 　　2.2 反复自然流产组中，习惯性流产组中流产次数＞3次组92例患者中封闭抗体阴性81例，阳性11例；3次组阴性60例，阳性44例。两者比较差异有统计学意义（χ2=147，χ20.05（1）=3.84，χ2＞χ20.05（1）P＜0.05）。说明封闭抗体缺乏与反复自然流产相关；相关性随流产次数增加而增强。 　　3.讨论 　　妊娠是一个复杂的生理过程，从免疫学上来看类似于器官移植。胚胎有来自男方和女方的基因，是一个半非己的同种自然移植物，具有同种异体移植及自体移植的双重