食品微生物学第五章微生物的遗传变异.ppt

步骤： 1.目的基因的获得 2.载体的选择 3.目的基因与载体连接，构成重组载体 4.将重组载体引入受体细胞 5.筛选带有目的基因的转化细胞 6.鉴定外源基因的表达产物 * 1.微生物菌种的保藏 微生物生长的条件：温度、水分、氧气、 营养、pH、渗透压等。 微生物保藏的原理： 采用低温、干燥、缺氧、缺乏营养、添加酸度中和剂等方法，使微生物生长代谢受到抑制。 五、微生物菌种的保藏及复壮 * A：蒸馏水悬浮法：保存时间较短 B：斜面传代保藏法：实验室用，4～6℃保藏， 每3～6个月转接1次。 C：矿物油浸没法：隔绝空气 D：干燥载体保存法：沙土管，保存孢子或芽孢， 1～10年。 菌种保存方法 * E：冷冻保藏： -20℃普通冷冻保藏：1～2年，多数微生物不适用。 -60℃超低温冷冻保藏：添加冷冻保护剂，5年。 -196℃液氮冷冻保藏：工业微生物菌种最好的保藏方法。 F：真空冷冻干燥保藏：真空冻干，不需要冷藏，10年。 * 退化：菌株生产性状的劣化或有些遗传标记的消失。 退化原因： 基因的负突变，随传代次数增加，负突变个体的 比例逐渐升高。 2.菌种退化与复壮 * 防止措施： 合理育种、合理的培养基（限制性、 抑制剂）、合理的培养条件（低温、干燥、缺氧）、控制传代次数、有效的菌种保藏方法。 复壮：纯种分离、诱变 * * 将E.coli分别培养在以放射性32PO43-或35SO42-作为磷源或硫源的组合培养基中，可以获得含32P-DNA的噬菌体或含35S-蛋白质的噬菌体。 将两种带有不同放射性的噬菌体分别感染寄主，10min后用捣碎器使噬菌体外壳脱离寄主细胞，离心后测定上清液和沉淀的放射性。 （1）含32P-DNA的一组：放射性85%在沉淀中 （2）含35S-蛋白质的一组：放射性75%在上清液中 * 一个种或品系的生物吸收来自另一个种或品系生物的遗传物质,通过交换组合把它整合到自己的基因组中去，从而获得后者某些遗传性状的现象。 1.转化 * 转化过程： 从供体菌中提取DNA片段 与受体细胞结合 DNA片段中的一条链降解，另一条侵入 与受体细胞染色体上的同源区段配对 合成双链 染色体复制 细胞分裂 形成转化子 * 转化因子：供体菌的DNA片段 转化子：转化后的受体菌 感受态：细胞能从环境中吸收转化因子的生理状态。 影响感受态出现的因素：菌种的遗传特性、生理 状态、培养环境等。 * 影响转化效率的因素： 受体细胞的感受态 受体细胞的限制酶系统和其它核酸酶 受体和供体细胞的同源性。 * 2.转导 以噬菌体为媒介，把一个菌株的遗传物质导入另一个菌株，并使该菌株获得另一菌株的遗传性状。 * 普遍性转导：噬菌体能传递供体菌株的 任何基因。 特异性转导：噬菌体只能传递供体菌株的 某些特定基因。 * 普遍性转导过程： 噬菌体侵染供体细胞 供体染色体断裂， 噬菌体蛋白质衣壳和DNA合成 衣壳包裹供体 DNA片段 侵染受体菌株 供体DNA片段整合到受体DNA上——完全转导 供体DNA片段不能整合到受体 DNA上，也不能复制，但能表达 ——流产转导 * 特异性转导过程： 噬菌体侵染供体细胞 供体细胞溶源化 噬菌体和供体菌染色体间发生交换 转导型 噬菌体（转导颗粒） 侵染受体菌 形成稳定转导子（取代） 形成不稳定转导子（整合) * 供体和受体菌直接接触传递遗传物质。 遗传类型不同时称为杂交。 3.接合 * F因子：一种质粒，能自我复制。 F-菌株：雌性细菌不含F因子。 F+菌株：F因子游离在染色体之外，为自主复 制的环状DNA小分子。 Hfr菌株：F因子整合在染色体上，随染色体一起 复制。（high frequency recombination) F`菌株： F因子游离，但带有一小段细胞核DNA。 雄性细菌 * 接