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AccQ·Tag氨基酸分析方法氨基酸分析方法
氨基酸分析方法氨基酸分析方法
氨基酸分析的特点氨基酸分析的特点
氨基酸分析的特点氨基酸分析的特点
❀ 多数氨基酸没有“显色基团”
✎无法用简单的方法检测
❀ 所有的氨基酸极性都很大,无法反相分离
RCH (N + H 3 )COO−
❀ 需要进行处理:“衍生”
✎增加显色基团,提高检测灵敏度
✎ 改变样品的极性,改变分离模式
氨基酸样品衍生的目的氨基酸样品衍生的目的
氨基酸样品衍生的目的氨基酸样品衍生的目的
❀ 提高检测的灵敏度
✎增加紫外基团以增强紫外检测的灵敏度
✎增加荧光基团以便使用高灵敏度荧光检测器
❀ 改变分离的选择性
✎ 改变组份的基团,如:
➠ 变离子型化合物为非离子型,用反相方法分离
什么是什么是AccQ·Tag方法?方法?
什么是什么是 方法方法??
❀ AccQ·Tag方法是一种用于肽及蛋白质水解氨基
酸分析的柱前衍生技术
❀ AccQ·Tag方法的内容包括 :
✎用Waters 的AccQ·Fluor™衍生试剂(AQC)衍
生氨基酸
✎用反相HPLC分离衍生产物
✎用荧光或紫外检测器定量检测衍生产物
AccQ·Tag方法的基础方法的基础
方法的基础方法的基础
❀ AccQ·Tag方法的基础在于专为氨基酸分析而开
发的衍生试剂-AQC (6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀
酰亚氨基氨基甲酸酯)
❀ AQC是含N-羟基琥珀酰亚氨基的活性杂环氨基
甲酸酯,它是一种新型氨基衍生化试剂,结构如
下 :
H O
N O
N
N O
O
AQC衍生试剂
AccQ·Tag方法对仪器的要求方法对仪器的要求
方法对仪器的要求方法对仪器的要求
❀ 一套Waters HPLC 梯度系统 :
✎2690(含脱气装置和柱温箱)-2487和/或474检测器
_M32色谱管理系统
✎600_在线脱气机_柱温箱_717(或7725i)_2487和/或
474_M32色谱管理系统
✎515×2_PCM_Mixer_柱温箱_TCM_717(或7725i)_2487
和/或474_M32色谱管理系统
❀ 若非Waters 的HPLC系统,则由于泵精度和仪器
系统体积等原因,可能得不到满意的分析结果
AccQ·Tag方法所需的辅助设备方法所需的辅助设备
方法所需的辅助设备方法所需的辅助设备
❀ 衍生用 :
✎涡旋搅拌器
✎微量移液器 (1-100µl)
✎烘箱 (可恒温至55℃)
❀ 配制流动相用 :
✎超声波清洗器
✎pH计 (精确到0.01)
✎溶剂过滤装置
✎100ml和1000ml量筒
✎500ml或1000ml烧杯
✎纯水器 (可制备18M Ω无有机污染物之高纯水)
AccQ·Tag方法必需化学品方法必需化学品
方法必需化学品方法必需化学品
❀ 一套Waters AccQ·Tag 化学组件包,包括 :
✎Waters AccQ ·Fluor 试剂盒试剂盒- 含有下述三种试剂各5瓶∶
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