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水牛波形蛋白基因克隆及其表达分析-南方农业学报
南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture 2017,48(12):2266-2272
·2266 ·
ISSN2095-1191;CODENNNXAAB 南 方 农 业 学 报 48卷
DO :10.3969/j.issn.2095-1191.2017.12.24
水牛波形蛋白基因克隆及其表达分析
*
濮黎萍,候 振,徐壮壮,陈富美,王焕景,黄凤玲,张 明
(广西大学 动物繁殖研究所/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁 530004)
摘要:【目的】克隆水牛波形蛋白(VIM )基因,并明确VIM基因在水牛成熟卵母细胞(MII期)和早期胚胎(2-细胞阶
段)中的表达情况,为研究VIM在卵母细胞成熟及附植前胚胎发育中的作用机理打下基础。【方法】根据GenBank上已
公布的水牛VIM基因mRNA序列设计引物,采用RT-PCR克隆水牛VIM基因,利用在线软件程序对克隆获得的水牛VIM
基因进行生物信息学分析,同时以细胞免疫荧光试验检测VIM在水牛成熟卵母细胞(MII期)及早期胚胎(2-细胞阶
段)中的表达情况。【结果】水牛VIM基因长度为1469 bp ,其编码区长度1401 bp ,编码466个氨基酸。水牛VIM基因序列
与人类、黑猩猩、食蟹猴、家犬、马和牛的VIM基因序列具有高度的同源性,分别为93%、93%、93%、94%、94%和99% ;
基于VIM基因序列构建的系统发育进化树也显示水牛与牛的亲缘关系最近。水牛VIM 的分子量为53.73 kD ,理论等
电点(pI )5.05 ,主要在线粒体中表达,稳定性差(不稳定系数53.65),具有较强的亲水性,无跨膜结构,不属于分泌型蛋
白,其蛋白结构以α-螺旋为主。VIM在水牛成熟卵母细胞(MII期)及早期胚胎(2-细胞阶段)中均有表达,且在成熟卵
母细胞中的表达量明显高于早期胚胎。【结论】水牛VIM基因编码序列具有较高的保守性,且在水牛成熟卵母细胞
(MII期)中的表达量明显高于早期胚胎(2-细胞阶段)。
关键词:水牛;波形蛋白(VIM );基因克隆;生物信息学分析;表达分析
中图分类号:S823.83 文献标志码:A 文章编号:2095-1191(2017 )12-2266-07
Cloningandexpressionanalysisofbuffalovimentingene
PU Li-ping ,HOU Zhen ,XU Zhuang-zhuang ,CHEN Fu-mei ,WANG Huan-jing ,
HUANG Feng-ling ,ZHANG Ming*
(Animal Reproduction Institute/State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-Bioresources ,
Guangxi University ,Nanning 530004 ,China )
Abstract:【Objective 】Buffalo vimentin (VIM )gene was cloned and its expression was identified in buffalo mature
oocyte (MII stage )and early embry
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