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细菌学检验 细菌学检验基本技术 第一节 样本的采集与送检 在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气，各种物品）、正常人体及临床等的样本。 一、临床样本的采集与送检 （一）血及骨髓样本的采集 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时，应采集双份量，分别作双相培养(37℃/28℃)。骨髓1 ml～2 ml。 4. 样本的送检：尽快，室温 5. 注意事项：同时需氧和厌氧培养 一、临床样本的采集与送检 （二）尿液样本的采集 1. 采样时间：晨尿、用药前 2. 采样方法：10ml，中段尿、肾盂尿、导尿 3. 注意事项：无菌操作，用药前 （三）粪便样本的采集 1. 采样时间：急性期、新鲜粪便 2. 采样方法：自然排便、直肠拭子、Cary-Blair运送培养基或pH7.0的甘油PBS 3. 注意事项：无菌操作、可能厌氧培养 一、临床样本的采集与送检 （四）痰及上呼吸道样本的采集 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法、气管穿刺法等 ；咽拭子 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存 一、临床样本的采集与送检 （五）其它临床样本 化脓和创伤样本：棉拭子 脑脊液、胆汁、胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜液等：穿刺 生殖道：棉拭子 组织样本：内镜 炎症或组织坏死部位：手术 二、食品卫生细菌学检验样本 （一）样品采集原则 注意代表性，防止样品受污染、变质和细菌生长 大样(一整批 )、中样(混合200g )和小样(检样25g) （二）样品采集方法 无菌用具、包装完好、混合、震摇、冷冻、冷藏 （三）采样的数量 根据食品种类的不同，采样的数量也应不同 （四）注意事项 3h内送实验室，无菌操作 三、化妆品细菌学检验样本 （一）采样数量 每批两个大包装抽取4个包装，10g或10ml （二）样本的处理 1. 液体样品：10倍稀释，油性物用液体石蜡、土温-80 2. 膏霜乳剂样品：亲水性-玻璃珠，疏水性-先行乳化 3. 固体样品的处理：均质后取上清液 （三）样品送检原则及注意事项 1. 维持样品污染原状（出厂污染状态） 2. 去除残留防腐剂及抑菌剂（吐温-80和卵磷脂 ） 3. 注意事项（室温存放，多项目时先做微生物） 四、生活饮用水细菌学检验样本 （一）水样采集 许多水体随时间和空间会发生很大变化，要采集具有代表性的样品，必须定出合理的采样规划。 （二）采样点的选择 注意样品的代表性，河水、湖水、地下水、自来水 （三）采样器具 采样瓶、自动采样器、容器可加硫代硫酸钠 （四）样品送检及注意事项 4h内检验、可冷藏 五、消毒及卫生用品 （一）医疗卫生机构消毒及卫生用品 物表 ：5cm×5cm灭菌规格板，100cm2 区域 空气：高度150cm、距墙100cm；面积≤30m2，设一条对角线上内、中、外3点；面积 ＞ 30m2，设4角及中央5点，暴皿5min；或用采样器 手/皮肤粘膜：含中和剂棉拭子，5cm×5cm规格板 医疗用品：破坏、棉拭子 消毒剂：1ml加至9ml中和剂中 五、消毒及卫生用品 （二）一次性使用的卫生用品 同一批号3个运输包装中至少随机抽取12个最小包装量；1/4用于检测、1/4用于留样、2/4就地封存准备复测。 六、空气样本 平板沉降法和采样器采集法 （一）空气微生物采样器分类 按照采样方式的不同可分为两类(Ⅰ和Ⅱ类)，Ⅰ类是将微生物直接采到固体培养基上(如Andersen采样器)，Ⅱ类是把微生物先采到液体或其它介质上，再转种到培养基或细胞上显示(如Porton采样器)。 六、空气样本 按照流量的有效数字分，3位数以上为大流量(≥500 L/min)，2~3位数为中流量(499L/min～11 L/min)，1位数为小流量(≤10L/min)。 按照采样器所用介质性质又可分为固体及液体采样器。 按采样器的工作原理可分为六种：撞击式、沉降式、过滤式、静电吸附式、旋风式和离心撞击式采样器。 六、空气样本 （二）空气中细菌等微生物采样的介质 采样介质(包括培养基)对细菌等微生物具有支撑、黏附、保护和生长作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化烯二十二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白) （三）空气中细菌等微生物采样方法及送检 1. 平板沉降法：参见医院空气采样规定。 2. 空气采样器采样：常用Andersen采样器 第二节 细菌的形态结构检查法 了解标本中有无细菌及其大致的数量。 验证培养物是否为纯种。 形态检查结果可做初步