分布稻田的三种不同体色泥鳅组织LDH同工酶的研究.doc

分布稻田的三种不同体色泥鳅组织LDH同工酶的研究 f 安徽农业大学,1996,23(2):155—159 分布稻田的三种不同体色泥鳅组织 LDH同 .鲞垩兰釜一 (安徽农业大学畜牧水产学院,合肥230036) 摘要本文报道了应用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(PAGE)分析研究分布于稻田的三种不同体 色泥鳅在心肌,骨骼肌,肝脏,眼,血清七种组织嚣官中LDH同工酶的表达特征.电泳图谱表明,在 这些组织中,主要存在LDHz和LDH3,其他同工酶的活?陆较低,甚至没有定量分析进一步表明LDH 同工酶的组织分布和活力均具有明显的组织特异性:在脑组织LDH2活性最强,其它组织如血清,眼, 卵巢,肝脏 关键词 分类号 泥鳅 外酬? Migurnusanguillicaudatus.),属鲤形目(Cypriniformes),鳅科(Cobitidea)的 小型食用鱼类,高蛋白,低脂肪,具药用价值;对环境适应性,抗病性强,饵料来源广, 管理方便,已成为我国具一定经济价值的养殖对象目前对泥鳅的人工养殖及鱼肉品质 的氨基酸分析等的研究较多.J.而鱼类LDH同工酶是研究鱼种的遗传结构的重要依据, 为此我们对分布于安徽合肥地区稻田中三种不同体色(即黄底深褐色斑点,青黄底深褐 色大斑点,青黄底深褐色小斑点)泥鳅L的LDH同工酶(乳酸脱氢酶同工酶),进行了初 步研究,了解泥鳅的生理生化等生物学特性,为系统演化,发育生物学及遗传育种提 供科学的依据 1材料和方法 1.1泥鳅血清及组织酶液的制备 实验用泥鳅取自合肥市场,共计200尾,体长5～15cm.将断尾获得的血置室温约 2h;取析出的血清备用.在冰浴条件下,取肝脏,骨骼肌,心肌,卵巢,脑和眼组织各 0.Ig,分别加I.Oml冰冷的0.02M,pH7.0PBS匀浆,于4℃条件下,10000rpm离心 10min,取上清液作组织酶电泳用. 1.2电泳方法 聚丙烯酰胺凝胺垂直板电泳(Polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)L4],分离胶 5.0H,浓缩胶2.5电极缓冲液为pH8.3的Tris--Gly,在4C下12.5mA/cm电泳4h. 收稿日期{1995—10—18 安徽农业大学 1.3LDH同工酶染色 染色按Dietz等方法. 1.4摄影和放大 摄影和放大见傅文瑜方法. 1.5酶谱的记录 染色后的凝胶用日本岛津CS--930扫描仪扫描,波长550nm,打印并计算出图谱和 各酶带的相对百分含量. 2结果 2.1三种体色不同的泥鳅组织LDH酶的电泳图谱 选择了三种体色不同的泥鳅,即黄底深褐色斑点,青黄底深褐色大斑点,青黄底深 褐色小斑点,并应用PAGE分析了他们七种组织的LDH同工酶:结果表明(如图1所 示),尽管它们的体色不同,但它们七种组织中LDH同工酶电泳图谱却是相同的,即具 有相同的组织特征和相对迁移率:从正极端到负极端,依次编号为LDH～LDH和 cLDH~eLDH.在血清,眼,卵巢,肝脏和心肌均出现LDHz和LDH两条区带;脑出 现LDH,LDH.和LDH三条区带}骨骼飘劂出现垒部五条区带.此外,在卵巢和肝脏 分别有eLDHz一条和cLDHl,cLDH,eLDH三条区带 cL0～ D|b M!一 cL腊— I一 I嘲～ I LDH , ~- 一擎霸黪睽 LD}h一 图l泥鳅不同组织的LDH『司工酶电站图 Figure1ThealeclrophoreticIr|0dlemaps0iLDHisoenzymesindifferenttissues oftheM.anguillicoa~datus 1.心肌2.骨骼肌3.肝脏4.卵巢5.脑6.眼7.血清 1,skeletalm.scle2.cardiacmuscle3.1iver4.ovary5.brain6.eye7.serum 2.2三种体色不同的泥鳅组织LDH酶活力的测定 进一步应用薄板扫描仪对这三种体色不同泥鳅的七种组织LDH酶括性作了测定. 结果如图2所示:与电泳图谱相对应,在血清,眼,脑,卵巢,肝脏,骨骼肌和心肌分 别存在两至五个峰. 根据扫描图谱和打印的峰值结果,计算出的各种组织中LDH同工酶的百分比和组 成LDH酶亚基比值的结果(如表1和表2中)表明,泥鳅LDH同工酶的组织分布特征 还表现在亚基组成百分比即LDH同工酶括性大小等方面;其中在血清,眼,卵巢,肝脏, 23卷2期朱翠兰等分布稻田的三种不同体色泥鳅组织LDH同工酶的研究157 骨骼肌和心肌均是LDH为主,尤其是在眼和肝脏分别为78.3和72.6;在脑组织以 LDHz为主(占96.3).比较了三种体色不同泥鳅各种LDH同工酶在七种组织中百分比 数值,结果表明,它们几乎相同,其C.V值均小于3. - 表1泥鳅不同组织LDH同工酶的百分比() Table