共培养you导小鼠胚胎干细胞向软骨细胞分化的初步研究.docVIP

上海交通大学 博士学位论文 共培养诱导小鼠胚胎干细胞向软骨细胞分化的初步研究 姓名：谢峰 申请学位级别：博士 专业：整形外科学 指导教师：曹谊林上海交通大学博士学位毕业论文 目的：探讨软骨共培养体系诱导小鼠?细胞向软骨细胞分化的 ???赴??? 及??Ｔ诘谝徊糠郑?躺?ü獾鞍???标记的? ?细胞初步 ??庖哂ü馊旧?翱剐∈笾饕W橹?嗳菪钥乖?????? ??免疫荧光染色。前两种染色主要是显示标本内软骨生成情况， 上海交通大学博士学位毕业论文 ???猦?? 结果：实验第一部分的结果显示：实验组形成软骨组织和畸胎瘤 ? 上海交通大学博士学位毕业论文 ?????? ? ????篢? ?? ? ? ? —???? ?? ? ??? ? ? ????．? ? ? ? ? ? ??? ? Ⅷ 上海交通大学博士学位毕业论文 ??．? ? ????? ??? ??? ??? ????? ? ????? ? ? ???? ????????? ? ? ???? ???畉? ?? ? ? ? ????? ? ? ? 上海交通大学博士学位毕业论文 ??? ?齅 ??? ? ??? ?????? ??? ?? ?? ?? ?????? 上海交通大学博士学位毕业论文 上海交通大学 ? 上海交通大学博士学位毕业论文 上海交通大学 ??? 展?们。这要求我们寻求另外一种方法，可以更有效地得到充足的种子细胞。胚 ?????珽?来源于胚胎囊胚期的内细胞团块，它有 强大的增殖和分化潜能?】。理论上可以无限扩增，并且可以分化为三个胚层的任 何一种细胞。现有许多关于?细胞向肌肉细胞、神经细胞、胰岛细胞的分化报 ????。关于?细胞向软骨细胞的诱导分化，现有的报道相对较少。??? ??，???诜╢引，诱导?细胞向软骨细胞分化。 ??? ????? 和???后，可以使小球内细胞完全分化为软骨细胞。如果在培养液中加入硫代 三维培养体系更符合软骨的生理环境，因而更有利于软骨的分化。 ? 上海交通大学博士学位毕业论文 ?细胞向软骨细胞分化 节软骨细胞按一定比例?：?混合后接种于??牧希?逋馀嘌?周后植 体系可以诱导小鼠?细胞向软骨细胞分化，但得到的软骨组织不纯，混有畸 上海交通大学博士学位毕业论文 ??? ?等。????的报道中，不但加入了生长因子，而 且将分选后的?细胞经过离心后形成小球????，形成立体的细胞生长环境， 件下就能诱导???蛉砉窍赴?只??谔逋獬晒?菇ㄗ橹?こ袒?娜砉亲橹??】。 中科院上海生化细胞所赠送 ?????? 上海交通大学博士学位毕业论文 ???? 上海净化设备厂 ??苛衙顾谻 ???小鼠 上海生工生物工程有限公司 他内脏细胞的污染。 养皿??内。 ?甅?细胞铺盘后?天内可以使用。 ?弃废液，??逑??遍 上海交通大学博士学位毕业论文 ??炒嬉旱呐渲疲篋??篎?：???：?篒 ?????分钟，用?短寤?暮????的?? 第二天移至液氮罐内 ???柿５亩炒妫荷倭亢?兄柿５木?憾炒妫?员敢院笫褂谩??微升细菌 ???岩汉螅?尤?毫升?液，震荡?分钟 ??骄?肿暗搅礁鍪占?苣冢?抗苣诩尤?毫升。 用?滤膜将裂解液过滤到一个?毫升离心管内，离心???／分钟， 上海交通大学博士学位毕业论文 ? ?液，室温静置?种雍螅?胄?分钟。将?毫升离心管内的洗脱 ??柿Ｓ肗? ?琀???限制性内切酶处理，检测所得质粒是否是目的质 ?细胞培养皿中，置??、 ???∈焙筇婊缓珿??腅?赴?嘌?海?跖ǘ任??‘??，逐 ??粞∧褪蹽??腉?阳性细胞克隆。 ?痬?的?细胞培养液中培养、扩增。 上海交通大学博士学位毕业论文 ??? 上海交通大学博士学位毕业论文 ???的???渭?．??牟锰錒段。幽卜?D谇忻窷? ?瓾???作用后，屯泳检测所 得到的片段。左边出现得两条条带???为???片段，???为载体质粒片段，也边的 ? ??? ????疭 ?细胞向软骨细胞分化 上海交通大学博士学位毕业论文 使用时解冻，置于???浔４嬉恢埽??谥煊猛昶?ァ?????肿昂笾??冰箱保存半 ????? ?????? ???赴?贕???铺盘传代 所述： ???弦海琍?冲洗??遍 ??胄???#?种印?分钟 ??， ???弦海琍?冲洗??遍 ?细胞分化培养液混匀，计数 ??危?天时培养皿内加入??只?嘌?骸?? 天收取?。 使?自然下沉。 ??尤?～??腇?中和。用?号针头抽吸一次，将细胞打散为单细 ????鲥?????毫升 ??? ??，?蟯需要新鲜配制，培养液放置时间过长后需要补 ??，???毫克均匀地 上海交通大学博士学位毕业论文 ??? ?? 是增强材料的生物相容性，使细胞，特别是?细胞更容易黏附于材料。 ?细胞悬液接种聚乳酸一聚羟基乙酸复合生物材料。??赴?5?天 上海