圆二色谱仪使用.docVIP

PAGE 10 PAGE 10 圆二色谱仪 使用手册 实验前请先阅读第一部分注意事项 2011年4月6日整编 河北大学理化中心 目 录 一、 注意事项 二、 光源的选择 三、 MOS 450波长的校正 四、 电压的调节 五、 MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程 六、 MOS 450-SFM 300动力学操作方法 一、注意事项 1、滴定及变温实验时，需要磁子搅拌。实验结束时首先拔掉搅拌电源。在样品池内无磁子的情况下搅拌器空转会烧毁控温元件。 2、光源(也就是氙灯或汞氙灯)不可频繁开关。举例而言，如果马上不用仪器，但半个小时后需要使用仪器，就不要为了节约光源寿命而将光源关闭。短时间内频繁开关光源反而会缩短光源寿命。 3、光电倍增管移动时(比如从圆二色模式换为荧光模式)，注意用软件将Hv（高压）关闭。 4、扫描速度在0.5-5s/nm。使用手册上写的扫描速度有误，特别注意不要低于0.5秒/nm,过快的扫描速度易造成calibration移位。 5、如需用到emission单色器，就是那个需要用光纤连接的单色器，扫描速度要大于1s/nm,连0.5s/nm都不能用。 6、PMT的HV不要超过1000V. 7、使用控温附件进行变温实验时，一定要将地上的那个水浴恒温槽打开，水槽温度设为20度以下即可。 8、TCU上设置为remote; Power supply设置为ARC. 9、仪器运行过程中，更换样品时，shutter最好关闭。  二、光源的选择 1、电源： 图1中的Lamp power supply处有Xe（红色）、Xe(Hg)（红色）、零线（黑色）三个插孔。 零线插头为黑色，直接插到黑色的零线插孔中。 火线插头为红色，在做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时插在Xe（红色）插孔中，在做快速动力学测量的时候插在Xe(Hg)插孔中。 2、光源选择： 图2中的Vertical setting部位下方的底座上有Xe、Xe(Hg)两个标示前后排列。手动松开中间的大圆头Screws(图2中)，可以拉出或推进Vertical setting。当Vertical setting的金属头通过前后移动到下方的哪个标示位置上，也就是那个标示所示的灯正对着光路，为测试用光源。做快速动力学测量的时候选Xe(Hg)，做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时选Xe，最后再旋紧中间的大圆头Screws。 注：Xe（Hg）灯中的Hg元素有一些很强的特征谱线，加强了Xe元素发光的强度，对于动力学测量要求一个波长的光源能量要强，才能测量较为精确的谱图。而对于光谱扫描，单独的Xe元素谱线较为平滑，光源对扫描的影响较小。 图1 图2 三、MOS 450波长的校正 仪器使用一段时间后需要对仪器进行波长校正，以保证测量的准确性，波长校正的操作步骤如下： 确认样品仓中没有任何样品和样品池。 根据光源选择的操作说明，将光源换为Xe（Hg）灯。 打开ALX-250、MM-450和PMS-450电源。 点击电脑中的BioKine软件图标，进入测量主界面。 在主界面选择Device菜单的Scanning spectrometer命令，进入光谱扫描界面。点击按钮设置参数，在光谱测量模式里选择Fluorescence模式，波长扫描范围200-750nm，进行光谱扫描，得出如图1所示谱图。此时检测器位置为与入射光成180度的位置，不用改为荧光的位置。 图1 谱图在546nm处应该出一个峰，比较546nm处的峰是否有偏差。如果超出+/-1nm的范围，需要进行波长校正。 举例说明，如果在550nm处出峰，波长偏了4nm，那么就在图2所示主界面左下栏的Ex处填入550nm，按回车键。 图2 点击图2主界面Install菜单的Spectrometer advanced settings命令，出现图3所示的窗口，点击Excitation下方的Calibration按钮，进入波长校正界面，如图4。 图3 图4 在图4所示窗口里的Current wavelength处输入546，点击OK按钮，进行波长校正。 Xe 灯校准波长467nm；Xe(Hg)灯校准波长546nm。 操作完以上各步骤，波长校正完成。可进行正常的测量操作。 四、电压的调节 选择Xe灯，打开ALX-250稳定10分钟，将ALX-250的功率调整到150 W； 在打开ALX-250的同时，打开MM-450电源，机器预热10min； 确保空仓（样品池中无待测样品）。狭缝设置为2nm 点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界