临床常用细菌药敏试验的方法.docVIP

临床常用细菌药敏试验的方法 　　药敏试验能够快速的确定病原菌以及药物敏感结果，加强耐药监测，减少用药的盲目性，合理使用抗生素有效控制感染，避免耐药菌的产生，提升治愈率。临床微生物实验室应选择先进、方便的方法进行常规的抗菌药物敏感实验。 　　一、国内常用常用的四种方法： 　　第一种 纸片扩散法 　　原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，在纸片周围抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌圈。其大小反映测试菌对测定药物的敏感性，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度呈负相关。 　　优点：药敏试验具有重复性好、操作简便、试验成本相对较低、结果直观、容易判读、便于基层开展等。 　　缺点：其虽是一种传统、经典的药敏试验方法，但随着全自动微生物分析仪的推广和应用，K-B纸片扩散法出现药敏试验假耐药、受人为因素影响较大、试验耗时长的缺点也渐渐体现出来，同时快速性、准确性方面存在不足[1]。 　　应用：应用于兼性厌氧菌和需氧菌的检测，但应用于流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。 　　第二种 稀释法 　　稀释法是定量测定抗菌药物抑制细菌生长作用的体外方法，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。稀释法所测得的某抗菌药物能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度称为最低抑菌浓度（MIC）。 　　肉汤稀释法――有常量稀释法和微量稀释法，前者使用无菌试管，每一浓度抗菌药物的量通常为2ml；后者使用微量稀释孔，每空有0.1ml肉汤。用MH肉汤将抗菌药物作不同浓度的稀释后，再接种待测菌，定量测定抗菌药物的MIC或最低杀菌浓度。 　　琼脂稀释法―― 　　原理：将不同浓度抗菌药物分别混匀于培养基中，观察细菌在含不同浓度药物的平板上的生长情况，以抑制细菌生长的平板所含的药物浓度测得最低抑菌浓度。可同时做多株细菌的MIC测定，结果重复性优于肉汤稀释法，且易于发现耐药突变株或污染，是验证新药体外抗菌活性时常用的参考标准。 　　优点： 一是用药量极少； 二是操作距离缩短，减少了污染机会； 三是剂量容易控制； 四是结果可用仪器判定，降低了人为误差。五是能同时得到定量和定性结果[2]。 　　缺点：不同的接种密度在药物浓度恒定后对MIC有影响， 较小或较大的接种密度均产生较低的MIC值。 　　临床应用：该技术近年来已被推荐用于酵母菌的MIC测定，室间质控结果证明效果满意。 　　第三种 E-试验 　　原理：E实验法结合了稀释法和扩散法的原理和特点，操作简便同扩散法，但可以同稀释法一样直接定量出测试药物对测试菌的最低抑菌浓度（MIC），结果准确、重复性好。与纸片琼脂扩散法的主要区别在于，E试验所用的是浓度由高至低呈指数梯度分布的一种抗菌药物的商品化塑料试条，试条上面标出该抗菌药物的浓度刻度（μg/ml）。 　　优缺点：省时省力，判读方便，精确度高，能分辨出可能的杂菌污染，结果可靠，与经典的试管法相比，符合率高，且重复性好。缺点是试纸条价格昂贵[3]。 　　应用：在临床可作为常规药敏方法的补充，主要可用于厌氧菌、真菌、分枝杆菌的药敏检测，细菌耐药性的精确分析和耐药机制的研究及流行病学监测等方面[4]。 　　第四种 自动化仪器法 　　一种全自动系统是Vitek系统（biomerieux vitek），含有检测药敏试验的卡，系统由填充密封模版、读取培养基、计算机模版、数据终端模版以及打印机构成。Vitek卡培养后由微孔监测浊度，可在6-8小时内获得药敏结果。同时vitek系统可进行鉴定检测，大大简化了工作流程。 　　另一个自动系统是microscan autoscan walkaway（dade behring）。此系统使用肉汤微量稀释法，手工培养后，多分配设备将稀释后的菌液加入微量稀释管内，3.5-5.5小时后获得药敏结果。与vitek系统相同，microscan系统也可进行细菌鉴定。 　　自动化检测方法操作简单、检测快速、准确，但购买仪器一次投入过大，也不利于推广普及。主要应用于能使乳糖发酵、产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 　　二、国外临床还应用了如下几种方法： 　　第一，基因芯片技术检测细菌耐药性[5] 　　基因芯片技术是将无数预先设计好的寡核苷酸、cDNA、基因组DNA在芯片上做成点阵，与样品中同源核酸分子杂交。 　　优点：基因芯片可以大量、快捷地检测出细菌耐药性菌株以及引起细菌耐药性的基因的突变 ，由于其在检测中的高效率 ，因此要优越于传统的细菌学检测技术。目前基因芯片在微生物检测上主要应用于微生物的鉴定与检测、病原分型、毒力基因检测、耐药性检测等方面[6] 。 　　第二，生物超微弱发光 　　应用BACT-IST微生物分析仪对分离菌株进行鉴定和药敏试验，应用IF