丹参素在局灶性脑缺血大鼠体内药动学―药效学相关性的研究.docVIP

丹参素在局灶性脑缺血大鼠体内药动学―药效学相关性的研究 　　[摘要]为探讨丹参素在脑缺血损伤模型大鼠体内的药动学过程及其与抗脑缺血作用的相关性，该文建立了局灶性脑缺血再灌注（MCAO）模型，静脉注射丹参素（40 mg?kg-1）后，采用HPLC-DAD测定不同时间丹参素血药浓度，绘制药-时曲线；同时测定各时间点血浆中超氧化物歧化酶（SOD），乳酸脱氢酶（LDH）活性，绘制时-效曲线；用DAS 3.2.6 软件处理数据，并进行相关性分析，比较相同剂量的丹参素给药后在模型及正常大鼠体内的药动学差异以及模型大鼠给药后的药效学指标变化，评价丹参素在治疗脑缺血疾病中的作用。结果，脑缺血再灌注及正常大鼠体内丹参素药动学过程均符合二室模型，主要药动学参数t1/2α分别为（0.267±0.026），（0.148±0.020） h，t1/2β分别为（1.226±0.032），（1.182±0.082） h，AUC0-∞分别为（42.168±4.007），（26.881±1.625） mg?L-1?h，缺血再灌注后大鼠血浆中SOD活性降低，LDH活性升高，丹参素在一定时间内能抑制SOD活性下降，LDH活性上升。表明丹参素在脑缺血再灌注大鼠在体内较正常大鼠体内滞留时间更长，消除减慢，反映了丹参素临床治疗脑缺血疾病的合理性；丹参素抗脑缺血损伤作用可能与其在体内水平有关，其血药浓度与血浆中SOD活性呈正相关，LDH活性呈负相关。 　　[关键词]丹参素；药动学；药效学；抗脑缺血损伤 　　丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎，在临床上广泛用于心血管系统疾病的治疗，临床观察和动物实验都证明丹参具有广泛而复杂的药理活性[1]。丹参素是丹参的主要活性成分之一[2]，文献报道，丹参素对脑缺血再灌注损伤具有保护作用[3]，有关其药动学研究已有不少[4-6]，但大多限于正常大鼠，关于其在脑缺血大鼠中的药动学研究以及药动学与药效学相关性研究尚未见文献报道。本实验采用HPLC-DAD检测丹参素血药浓度研究其药动学，测定相应时间点血浆中SOD，LDH活性指标研究丹参素抗氧化能力，同时评价丹参素在脑缺血大鼠中药动学及药效学过程的相关性，指导丹参素抗脑缺血疾病的临床合理用药。 　　1材料 　　1.1动物 　　清洁级SD大鼠，雄性，体重（280±20） g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，许可证号SCXK（沪）2013-0016。 　　1.2试药 　　丹参素（HPLC检测纯度98%）购自西安鸿生生物技术有限公司；丹参素钠对照品（质量分数98%，上海源叶生物科技有限公司，批；对羟基苯甲酸（内标，纯度≥99%，上海五连化工厂）；肝素钠（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，批号2B010350）；超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒（批、乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒（批均购自南京建成生物工程研究所；甲醇、乙腈均为色谱纯（Tedia公司），其他试剂均为分析纯。 　　1.3仪器 　　Agilent 1200型高效液相色谱系统（包括G1311A四元梯度泵、G1316A柱温箱、G1315D二极管阵列检测器、G1315D DAD检测器、G1322A在线脱气机和化学工作站）。ND100-1氮气吹扫仪（杭州瑞诚仪器有限公司）；QL-861涡旋混合仪（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；XS205DU梅特勒精密天平（METTLER TOLEDO公司）；SpectraMax Plus384酶标仪（美国MD公司）；CASCADA BIO MK2超纯水仪（美国PALL公司）；2-16PK离心机（德国Sigma公司）。 　　2方法 　　2.1脑缺血模型制作 　　SD大鼠按体重分为模型组和正常组。模型组大鼠用10%水合氯醛（350 mg?kg-1）腹腔麻醉后迅速按照Longa等[7]的方法进行大脑中动脉局灶性栓塞，缺血1 h后拔出鱼线进行再灌注，扎紧切口，缝合回笼。模型成功的标志是动物苏醒后，大鼠出现右眼Horner征；提尾时左前肢内收屈曲；爬行时向左侧转圈或倾倒。最后取脑，脑内有凝血块或蛛网膜下腔出血者舍弃。 　　2.2给药与采血 　　12只SD大鼠，实验前适应喂养5 d，给药前12 h禁食，自由饮水。正常组组及模型组大鼠术后1 h取空白血浆0.5 mL。模型组大鼠缺血1 h，再灌注同时给药。2组大鼠均尾静脉注射丹参素生理盐水溶液（40 mg?kg-1），分别于给药后0.083，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，3，4，6，8，12 h眼眶取血0.6 mL，经肝素钠抗凝，4 000 r?min-1离心10 min，分离血浆，-20 ℃冰箱冻存待分析。模型组血浆分装