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二次通用旋转的设计优化草多糖提取工艺 　　摘要：为确定超声辅助提取?草多糖的最佳工艺条件，通过单因素试验确定液料比、超声功率、超声温度、超声时间等因素的较适宜范围，并应用二次通用旋转设计优化提取工艺条件。超声辅助提取?草多糖的最佳工艺条件为：液料比34 mL ∶1 g，超声功率134 W，超声温度61 ℃，超声时间49 min，此时多糖提取率为352%。经二次通用旋转设计优化后的?草多糖提取工艺具有试验次数少、计算简单、准确可靠等优点，工艺稳定可行。 　　关键词：?草多糖；超声辅助提取；单因素试验；二次通用旋转设计 　　中图分类号： R284.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）09-0308-04 　　?草[Humulus scandens （Lour.）Merr.]别称勒草、涩萝蔓、拉拉秧、五爪龙等，为多年生茎蔓草本植物，是广泛分布于我国（除新疆、青海、西藏外）各省份的常见杂草，其嫩茎和叶可作为食草动物饲料。?草是我国重要的中药材，其味甘苦、寒、无毒，具有清热解毒、利尿消肿的功效[1]。现代药理学研究证实，?草提取物具有抗菌、抗炎、止泻抑菌、降压、镇痛等作用[2]。?草中含有多糖、黄酮类化合物、胆碱、天门冬酰胺、挥发油、鞣质等成分。近年来，对?草中黄酮化合物、挥发油的成分与药理研究已取得一些进展，?草黄酮类化合物主要包含秋英苷（cosmosiin）、本犀草素-7-葡萄糖苷（luteolin-7-D-glrcoside）、牡荆素（vitexin）等；挥发油主要包含β-?草烯（β-humulene）、石竹烯（caryophyllene）、α-古巴烯（α-copaene）、α-，β-芹子烯（α-，β-selinene）、γ-毕澄茄烯（γ-cadinene）、苯甲醇、苯乙醇等[3]，然而关于?草多糖的报道极为少见。超声波辅助法具有简单、便捷、安全等优点，可缩短提取时间，增大多糖萃取率，目前已被广泛应用于植物多糖的提取。本研究采用超声波辅助法提取?草多糖，并应用二次通用旋转设计优化提取工艺，以期为?草资源的有效开发利用提供科学依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1原料与试剂?草采自吉林工商学院周边农田，去掉根部及枯黄部分，洗净后于60 ℃干燥8 h，粉碎后过60目筛，保存备用。葡萄糖标准品购自上海华蓝化学科技有限公司，蒽酮、浓硫酸、乙醇等试剂均为分析纯，试验用水为去离子水。 　　1.1.2仪器KQ200-KDV型超声波清洗器（江苏省昆山市超声仪器有限公司），UV-160A型紫外可见分光光度计（日本岛津公司），R-301型旋转蒸发器（上海科升仪器有限公司），SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵（河南郑州长城仪器有限公司），TGL-20M型离心机（湘潭湘仪仪器有限公司），FW177型中草药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。 　　1.2方法 　　1.2.1原料的预处理将粉碎后的原料按液料比5 mL ∶1 g加入石油醚，回流脱脂2次，每次1.5 h，滤去石油醚，滤渣挥干后获得预处理?草粉末。 　　1.2.2?草多糖的提取将预处理?草粉末按一定液料比加入水中，浸泡2 h后置于超声波清洗器，固定超声频率为 40 kHz，以不同超声功率、超声温度、超声时间进行提取。提取结束后过滤，用旋转蒸发仪将滤液浓缩至适当体积，加入3倍体积的95%乙醇醇沉24 h，离心烘干至恒质量。采用Sevage的方法[4]除去蛋白质，离心并取上清液进行浓缩，加入3倍体积的95%乙醇醇沉，所得沉淀用乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤，真空烘干后得到?草多糖。 　　1.3试验设计 　　针对影响?草多糖提取率的各因素进行单因素试验，并采用二次通用旋转设计优化提取工艺条件。固定超声功率120 W、超声温度50 ℃、超声时间50 min，分别按10 mL ∶1 g、20 mL ∶1 g、30 mL ∶1 g、40 mL ∶1 g、50 mL ∶1 g的液料比提取?草多糖，以确定超声辅助提取?草多糖较适宜的液料比。固定液料比30 mL ∶1 g、超声温度50 ℃、超声时间50 min，分别按80、100、120、140、160 W的超声功率提取?草多糖，以确定超声辅助提取?草多糖较适宜的超声功率。固定液料比 30 mL ∶1 g、超声功率120 W、超声时间50 min，分别按30、40、50、60、70 ℃的超声温度提取?草多糖，以确定超声辅助提取?草多糖较适宜的超声温度。固定液料比30 mL ∶1 g、超声功率120 W、超声温度50 ℃，分别按10、30、50、70、90 min 的超声时间提取?草多糖，以确定超声辅助提取?草多糖较适宜的超声时间。在确定各因素的适宜范围后，以?草多糖提取率为指标，作4因素5水平的二次通用旋转设