细胞实验技术-课堂ppt-第一讲细胞培养概述331.pptxVIP

细胞培养概述;授课对象：研究生授课教材：细胞培养，司徒振强、吴军正主编等主编， 世界图书出版西安有限公司授课教师：顾芸，王彩萍，刘晓宇带教研究生：一组负责人：彭苏 组员：龚佳欢、刘鑫、吴建成、叶永契 二组负责人：何春娇 组员：王盛燃、张薛杰、查广彬 从猛 神经再生重点实验室/神经科学系;学号;课程内容介绍;？WHY; 据CCTV4报道，13年10月中国台湾地区台北荣民总医院在干细胞研究方面有重大突破，研究人员利用干细胞已分化出网膜和心肌细胞，目前该研究正处于临床实验阶段，未来有望生产干细胞药品有效治疗失明、心脏病等。;一口好牙不但能给出一个美丽的笑容，还是健康的标志。但由于疾病或意外事故，我们可能失去牙齿。镶颗金牙吧，有损整体美观。现在好了，科学家成功利用人的尿液衍生的细胞诱导形成干细胞获得再生牙齿雏形。7月30日，这项研究成果刊登在学术期刊《细胞再生》上，同时也引发国际社会广泛讨论。; CLS生物治疗的原理是利用自身免疫杀灭肿瘤细胞。2011年诺贝尔医学奖获得者斯坦曼博士在1973年发现了激活免疫系统的关键细胞DC细胞。在20世纪80年代，科学家又培养出了具有肿瘤强杀伤效应的CIK细胞。这两种细胞是肿瘤生物治疗的关键。CLS生物治疗通过体外实验万倍扩增这两类细胞，再输回患者体内实现肿瘤大面积杀伤治疗。CLS多细胞生物免疫治瘤-有效延长生命长度3-5年,保证提升生物质量,实现瘤自我康复 .;细胞培养的应用;细胞培养的应用;细胞培养的优点;细胞培养的局限性;细胞培养的基本条件;;净化工作室;细胞培养室;; Sterile work area;Incubator (humid CO2 incubator recommended);大容量高压灭菌器 ;自动双重纯水蒸馏器 纯水仪;酶标仪 微孔板震荡器;水平离心机; 倒置显微镜;水浴箱;29;移液器;滤 器;培养基过滤除菌装置;负压;Media sterilization through a 0.22 μm membrane filter assembled in a filter holder;培养瓶、培养皿;实验器材的清洗和灭菌;一、玻璃制品的清洗 清洗工作包括；浸泡、超声、浸酸、冲洗四步。 1、浸泡；器皿在加中性洗涤剂的液体中浸泡数小时。新购的玻璃器皿必须彻底清洗。 2、超声；在加有中性洗涤剂的超声槽中超声30min。 3、冲洗，用水冲净，稍凉干后浸酸。 4、浸酸-清洁液，一般浸泡6h以上。以配制中等强度清洁液为例；重铬酸钾120g、浓硫酸200ml、蒸馏水200ml。 5、冲洗，及时冲净（不挂水为止） 6、烘干。;三：金属器皿;四、物品的包装及消毒 1、 洗净、烘干的物品应及时包装，常用牛皮纸、棉布、铝盒、以及专用金属消毒筒等。物品应标明品名、日期。 2、消毒； ⑴ 用压力蒸气灭菌，玻璃器皿一般15压力（ibf)-121℃.压力维持30min。培养用的液体以及塑料、橡胶制品常以10ibf-115℃，维持10min。 ⑵ 过滤除菌；有塑料、不锈钢微孔滤膜滤器，用正压过滤除菌。塑料的一般为针式滤器，直径25mm和50mm两种。不锈钢微孔滤膜滤器有500和1000ml两种。除菌用微孔滤膜，孔径为0.22um。注意滤完后要检查滤膜是否完整。 ⑶ 电离辐 射灭菌；核素产生的r射线或电子加速器产生的加速离子辐射物品杀细菌和微生物的方法。 ⑷ 环氧乙烷，化学灭菌。;;（二）缓冲液 由弱酸/弱酸强碱组成的盐或弱碱/弱碱强酸组成的盐如碳酸/碳酸氢钠，磷酸二氢钠/磷酸氢二钠。 细胞生活环境中无机盐种类很多，因细胞、组织的不同而不同，在所有细胞中无机盐都以离子状态存在。 ;二、培养基;（二）、促生长因子及激素;（四）、pH;（五）、无毒、无污染; 培养基分天然培养基和合成培养基。 天然培养基： 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好。 缺点：来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染。 ;合成培养基;水：新鲜配置的三蒸水或去离子水 平衡盐溶液(balanced salt solu