云南省石榴干腐病病菌生物学特性的研究及其防治药剂筛选.docVIP

云南省石榴干腐病病菌生物学特性的研究及其防治药剂筛选 　　摘要：以石榴干腐病病菌SGF1为供试菌株，采用菌丝生长速率法测定不同培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度、光照和湿度对其菌丝生长的影响，用血球计数板计测产孢量，并在室内筛选有效抑菌药剂。结果表明，该病原菌菌丝生长最佳培养条件为PDA培养基、以可溶性淀粉为碳源、蛋白胨为氮源、28 ℃、pH值为7、全光照、相对湿度60%。BA培养基、28 ℃、pH值8最适合产孢。58%甲霜灵?锰锌可湿性粉剂、75%百菌清可湿性粉剂和50%扑海因可湿性粉剂3种药剂抑菌效果最好，抑制率达100%。研究结果为云南石榴干腐病的防治提供了一定的理论依据。 　　关键词：石榴；干腐病；生物学特性；药剂筛选 　　中图分类号： S436.65 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2017）01-0099-04 　　石榴（Punia granatum）是滇南主要水果之一。云南省蒙自市由于北回归线穿境而过，独特的气候条件适宜石榴种植，曾获“中国石榴之乡”的美誉。目前蒙自市石榴栽种面积跃居全国首位，然而随着栽种面积不断扩大，石榴受到各种真菌病害的危害，严重影响其品质和产量。蒙自市石榴干腐病在1979年，戴芳澜先生的《中国真菌总汇》中早有记载[1]。1999年，周又生等研究蒙自市石榴干腐病发生规律及其防治，使蒙自市石榴干腐病得到有效控制[2]。2011年，蒙自市石榴干腐病再次暴发流行。据文献记载蒙自市石榴干腐病由石榴鲜壳孢（Zythia versoniana）引起[1，3]，而陕西省报道的石榴干腐病由石榴垫壳孢菌（Coniella granati）引起[4]。由此可见，不同地区石榴干腐病病菌种属分类地位不同，其生物学特性也会存在差异。周又生等研究蒙自市石榴干腐病病菌生物学特性，仅限于温度、湿度和pH值3个方面[2]，未对其碳源、氮源、光照等方面进行系统研究，防治化学药剂也仅限于百菌清、甲基硫菌灵、代森锌和波尔多液。鉴于此，笔者对蒙自市石榴干腐病病菌生物学特性及其抑菌剂做系统研究，以期为有效防控该病提供系统理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试菌株 　　从云南省蒙自市石榴种植基地采集症状典型的石榴干腐病病果，采用常规组织分离和单孢分离法进行分离纯化，获得的菌株（SGF1）于斜面培养基上低温（4 ℃）保存。 　　1.2 供试培养基 　　PDA（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）：马铃薯200 g、葡萄糖16 g、琼脂粉20 g、蒸馏水1 L；PSA（马铃薯蔗糖琼脂培养基）：马铃薯200 g、蔗糖16 g、琼脂粉 20 g、蒸馏水1 L；MA（玉米琼指培养基）：玉米30 g、琼脂粉17 g、蒸馏水1 L；WA（燕麦琼脂培养基）：小麦30 g、琼脂粉20 g、蒸馏水1 L；CA（胡萝卜琼脂培养基）：胡萝卜200 g、琼脂粉20 g、蒸馏水1 L；CM（查氏培养基）：硝酸钠2.00 g、磷酸二氢钾1.00 g、氯化钾0.50 g、七水硫酸镁0.50 g、硫酸铁0.01 g、蔗糖30.00 g、琼脂粉 20 g、蒸馏水1 L；BA（大豆葡萄糖琼脂培养基）：大豆200 g、葡萄糖16 g、琼脂粉20 g、蒸馏水1 L；WJA（万寿菊葡萄糖琼脂培养基）：万寿菊植株200 g、葡萄糖16 g、琼脂粉20 g、蒸馏水1 L。上述培养基配制好后均121 ℃高压灭菌25 min。 　　1.3 试剂 　　碳源（可溶性淀粉、α-乳糖、麦芽糖、葡萄糖、鼠李糖、木糖醇、D-甘露醇）、氮源（硫酸铵、硝酸铵、磷酸二氢铵、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、甘氨酸、尿素）。0.1% HCl、0.1% NaOH溶液，试剂均为分析纯。 　　1.4 供试杀菌剂 　　甲霜灵?锰锌、多菌灵、甲基硫菌灵、百菌清、扑海因、春雷霉素。上述材料均购自农贸市场及试剂公司。 　　1.5 不同培养基对菌丝生长的影响 　　将石榴干腐病病菌在PDA平板培养基中，28 ℃扩大培养7 d，在培养基同一半径周围用打孔器取直径为5 mm的菌块，同时接种于PDA、PSA、CM、MA、WA、CA、BA和WJA 8种培养基平板中央，设3次重复，在25 ℃下恒温培养7 d，十字交叉法测定菌落直径，用血球计数板计数产孢量[5]。 　　1.6 不同碳、氮源对菌丝生长的影响 　　以查氏培养基为基础培养基，分别用相等质量分数的碳源（可溶性淀粉、α-乳糖、麦芽糖、葡萄糖、鼠李糖、木糖醇、D-甘露醇）和氮源（硫酸铵、硝酸铵、磷酸二氢铵、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、甘氨酸、尿素）替换蔗糖和硝酸钠，设不加碳源、氮源为对照。接种及测量方法同“1.5”节。 　　1.7 不同温度对菌丝生长的影响 　　以PDA为供试培养基，接种后分别在10、15、20、25、30、35、40 ℃下恒温培