《第二章糖和苷》.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * 5、糖连接位置的确定 （1）苷元和糖之间连接位置的确定 以前通过分析由化学降解或酶解得到的产物来确定糖与苷元之间的连接位置，现在这种方法逐渐被NMR谱的解析所取代。 13C-NMR谱是确定苷元与糖之间连接位置的有效方法。在碳谱中，苷元羟基因与糖结合成苷，故可产生苷化位移。利用苷化位移规律，将苷和苷元的碳谱相比较，就可以很容易地辨别出苷元的哪个碳原子与糖相连接。 第六节：糖链的结构测定 (2)? 糖与糖之间连接位置的确定 ?? 　　　　 ┌ 化学法 ───── 全甲基化甲醇解常用方法 ┤ 　 　 └ 光谱法 ───── NMR法 1.?全甲基化甲醇解?上述甲基化及甲醇解的产物一般用TLC和GLC鉴定。 2.?NMR法 确定了糖的种类后，将苷的碳谱数据与相应单糖的碳谱数据进行比较，根据苷化位移规律确定单糖的连接位置。 　　 第六节：糖链的结构测定 6、糖链连接顺序的确定 ▲经典方法：缓和水解；酶解；乙酰解等 这些方法都是将苷部分裂解成次级苷或低聚糖，再分析鉴定糖的碎片。 虽然经典方法至今尚有一定的实际应用价值，但日新月异的波谱技术已正在取代其角色。 第六节：糖链的结构测定 ▲ MS法测定糖链连接顺序 ◆技术→FDMS、FABMS等。 ◆优点→不必制备衍生物,用量小,准确,简便。 第六节：糖链的结构测定 第六节：糖链的结构测定 7、苷键构型的确定： ▲经典方法：苷键构型的确定虽然经典的酶水解法、分子旋光法*（即Klyne法）仍时有应用，但目前多被NMR法所代替。 第六节：糖链的结构测定 第七节 糖及苷的提取与分离 一、提取 ●酶对糖及其苷类提取的影响 通常含糖及其苷类化合物的天然药材组织中往往同时含有酶，共存酶能促使苷键裂解，故药材粉碎后，受潮、冷水浸泡都能促使它们的相互接触致使苷键裂解，生成次生苷乃至苷元，影响原有成分及其作用，因此： ▲欲提取原始苷时，需杀酶，60%以上乙醇、甲醇或80℃以上水处理或先用碳酸钙拌匀后再用沸水提取； ▲欲提取次生苷或苷元，需利用酶，如发酵等。 ▲糖苷类具多羟基，极性较大，易溶于水，难溶于低极性有机溶剂，但苷类化合物的溶解度则因苷元性质不同而有较大差异。 ▲一般说来，糖苷类成分大多在甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯中溶解度较大，提取效率较好，又能抑制酶，故为优选溶剂；然而，水也为常用溶剂，尤其是糖的提取，可选用热水提取，但杂质较多，同时应注意共存有机酸的影响，必要时可用缓冲液。 二、提取糖及苷类溶剂的选择 第七节 糖及苷的提取与分离 由于糖及其苷类分子中多羟基的存在，难以结晶析出，若混有少量杂质，纯化结晶更难，故需采取多种方法方能达到分离目的。 三、杂质的除去 第七节 糖及苷的提取与分离 蛋白质去除法 ◆Sevag法、酶解法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸等：与蛋白质生成沉淀而不使多糖沉淀。 ◆注意：处理时间应尽可能的短，并在低温下进行，以免多糖降解。 第七节 糖及苷的提取与分离 （一）季铵盐沉淀法 （二）分级沉淀法 （三）离子交换色谱 （四）纤维素柱色谱 （五）凝胶柱色谱 （六）制备性区域电泳 四、分离 第七节 糖及苷的提取与分离 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 五、氧化开裂法（Smith降解法） 在过碘酸氧化的基础上进行温和水解的方法。 适用于：苷元结构容易改变的苷以及C－苷的水解研究。 不适用于：苷元结构上有邻二醇结构的苷类。 第四节 苷键的裂解 例：人参皂甙Rb1水解 第四节 苷键的裂解 反应分三步进行： 第一步：在水或稀醇液中，用HIO4在室温条件下将糖元氧化开裂成二元醛； 第二步：将二元醛用NaBH4还原成醇，以防醛醇进一步缩合而使水解困难； 第三步：调节pH2左右，室温放置让其水解。 第四节 苷键的裂解 第四节 苷键的裂解 HIO4 (NaIO4)+ NaBH4 + 稀H+ → R-CHO 碳苷还可以用FeCl3 氧化法开裂苷键→ 获得的糖为糖C1，C2间开裂的产物 例：葡萄糖碳苷→阿拉伯糖 C苷的Smith裂解 第四节 苷键的裂解 六、糖醛酸苷的选择性水解反应 糖醛酸苷键的裂解需要一些特殊的方法： 如：光解法、四乙酸铅分解法、醋酐-吡啶分解法、微生物培养法 第四节 苷键的裂解 第五节：糖的核磁共振性质 糖的1HNMR特征 第五节：糖的核磁共振性质 第五节：糖的核磁共振性质 化学位移规律： 端基质子： 4.3~6.0ppm 甲基质子： ~1.0ppm 其余质子信号：