中药千里光不同剂量及其配伍后毒副作用的观察opd6n39v.doc

中药千里光不同剂量及其配伍后毒副作用的观察 张超群 孙莉 孔祥蕾 杨滢瑶 李倩倩 指导老师：方肇勤 卢文丽 上海中医药大学2004级中医临床七年制、2007级中医，201203 [摘要] 目的：观察不同剂量中药千里光，及其配伍后对小鼠肝脏可能存在的毒副作用。方法：将小鼠随机分为空白对照组、千里光小剂量组、中剂量组、大剂量组、千里光配伍组及配伍药组共6组，灌胃7天后检测肝脏指数、肝脏生化指标ALT、AST及肝脏形态学等指标，分别于实验的1、4、7天检测体重。结果：实验中正常对照组意外死亡小鼠1只、千里光大剂量组意外死亡小鼠2只；与正常对照组比较，各组体重指数、肝脏指数以及生化指标AST差异无统计学意义（P0.05）；千里光中剂量组及配伍组生化指标ALT明显升高，千里光小剂量组生化指标ALT明显降低（P0.05）。结论：大、中、小剂量千里光、千里光配伍后，以及配伍药物未见显著的肝脏毒副作用。 [关键词] 千里光；肝毒性；ALT；AST；病理 近年来，中药的毒副作用已经成为国内外关注的热点。而一些中药，如千里光的毒副作用报道，最早可以追溯到1920。迄今已有多篇文献报道了千里光属所引起严重肝损害并伴有死亡的临床案例，其死亡率甚至高达27％[1]！千里光在中医临床上处方不是很多，但是以其组方的中成药品种却数量较多。临床剂量的千里光是否具有肝脏急性损伤的毒副作用、配伍后作用如何？本实验拟通过观察检测不同剂量的千里光对小鼠肝功能和病理的影响等研究，初步明确千里光及配伍后是否具有显著的毒副作用。 1材料与方法 1.1 材料 1.1.1实验动物 昆明种小鼠，雌性，72只，19～24g，清洁级 1.1.2仪器及设备 养生锅、电子秤、DK-S22型电子恒温水浴锅、722光栅分光度计、双面刀片、眼科镊、组织镊、眼科剪、解剖剪、染色架、染色缸、广口瓶、恒温水浴锅、生物切片、恒温箱、电子天平、脱水蓝、显微镜、NIKON数码相机 1.1.3药物与试剂 千里光（上海青浦产）、白菊花、石决明、甘草 10%福尔马林、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇、二甲苯、苏木精、甘油蛋白 、盐酸酒精、伊红 丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒（国食药监械（试）字2004第3060018号）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（国食药监械（试）字2004第3060020号） 1.1.4药物及其剂量 （1）千里光小、中、大剂量组。千里光分别为20g、40g、 （2）千里光配伍组。千里光、白菊花、石决明、甘草各20g，合计80g（相当于千里光大剂量的用药量）。 （3）配伍药组。白菊花、石决明、甘草各26.7g，合计80g（相当于千里光大剂量的用药量）。 1.2方法 1.2.1生药鉴定：向我校生药教研室崔亚君老师请教。 1.2.2动物分组及处理 将小鼠随机分成六组：空白对照组、千里光小剂量组、千里光中剂量组、千里光大剂量组、千里光配伍组、配伍药组，每组12只。 （1）空白对照组：第1～7天，每天１次灌胃自来水0.5ml/只。 （2）千里光小剂量组。第1～7天每天1次灌胃相应中药水煎液0.5ml/只（0.1g生药）。以人60kg，30g/日，及小鼠体重20g计，为成人公斤体重的10倍。 （3）千里光中剂量组。第1～7天每天1次灌胃相应中药水煎液0.5ml/只（0.2g生药）。为成人公斤体重的20倍。 （4）千里光大剂量组。第1～7天每天1次灌胃相应中药水煎液0.5ml/只（0.4g生药）。为成人公斤体重的40倍。 （5）千里光配伍组。第1～7天每天1次灌胃相应中药水煎液0.5ml/只（总药量0.4g生药）。 （6）配伍药组。第1～7天每天1次灌胃相应中药水煎液0.5ml/只（总药量0.4g生药）。 1.2.3指标观测 （1）一般情况 包括第1、4、7天动物体重、死亡情况等等。 （2）生化指标 最后一次给药后禁食16小时，眼球采血收集和分离小鼠血清，测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）。 （3）肝脏指数 第8天取小鼠完整肝脏拍照、称重，计算肝脏指数。 （4）肝脏病理切片观察 1.2.4 病理切片制作方法 （1）固定与修块 取小鼠肝脏块投入10％甲醛溶液，固定适当时间后予以修快成4mm3大小方形，继续固定约24h，入75％乙醇。 （2）脱水与透明 75％乙醇过夜→85％乙醇60min →95％乙醇（Ⅰ）30min→95％乙醇（Ⅱ）30min→100％乙醇（Ⅰ）30min →100％乙醇（Ⅱ）30min →1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20min →二甲苯（Ⅰ）20min →二甲苯（Ⅱ）20min （3）浸蜡、包埋与修块 浸蜡： 60℃恒温箱放置120min。 包埋：采用纸盒。包埋时将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一