临床病例中病原性细菌的分离与鉴定csxaf5lg.doc

实践五 临床病例中病原性细菌的分离与鉴定 目的要求 初步掌握动物疫病检测的采样技术、病原微生物的接种、分离、培养、纯化技术及鉴定技术 练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。 实验原理 为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各种方法分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离 实验材料 样品：临床病例 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、肉汤培养基、三糖铁培养基。 无菌水：装有45mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。 试剂：1万U/mL链霉素液、10％苯酚；剪刀，镊子，手术刀，冰块，保温盒，酒精灯 实验步骤 (一)动物疫病检测的采样技术： 重大动物疫病检测中，结果准确与否，样品质量是关键，因此采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法，科学采样 采样时注意隔离防护，隔离或防护服进出场要消毒，准备好采样所需的器具 家禽采样需要： 酒精棉、碘酒棉、5ml注射器、无菌棉签、塑料离心管、签字笔、记号笔、采样单等 牛羊采样还需：牛鼻钳、20ml注射器、采血真空管、采样杯、OP液保存容器等 猪采样还需：猪保定器、开口器、扁桃体采样器等 脏器的采取还需：解剖刀、齿锯、剪刀、手术刀、镊子、病料保存袋等 所有病原检测样品都需冷藏箱加冰块保存和运输 血清样品的采集 家畜采血方法： 雏鸡（禽）心脏采血 左手抓鸡，竖折，手持采血针，平行颈椎。从胸腔前口插入，回抽风有回稳中有降时，即把针心向外拉，使血液流入采血针 成年禽心脏采血 助手抓住两翅及两腿，右侧握保定，在触及心博动明显处或胸骨前端，背部下部凹处连线的1/2入消毒，垂直或稍向前方刺入2-3cm，回抽见回血时，即把针心各外拉，使血液流入洒血针 成年禽可采取翅静脉采血 助手一手握住禽的两腿，另一手握住两翼，在翅下静脉处消毒，手持采血针，从无血管处向静脉丛刺入，见有血液回流即把针心向外拉，使血液流入采血针，每只禽采血液2-3ml做好标记 牛羊采血方法 牛颈静脉采血 用手按住颈静脉沟的下端及近心端，可看到颈静脉隆起，消毒后在颈静脉隆起处，针头向头端方向快速刺入，抽取5ml血，采血完毕用酒精棉球按压并拔出针头 也可采用尾静脉采血 在牛尾根后下方4-5cm的正中，垂直刺入2-3cm，见有血液回流进入真空采血管 奶牛可乳房静脉采血 奶牛腹部可看到明显隆起的乳房静脉，消毒后在静脉隆起处，针头向后肢方向快速刺入，见有血液回流进入真空采血管 羊的采血方法：选用颈静脉采血，方法同牛颈静脉采血 猪的采血方法 耳静脉采血：站立保定，助手用力在耳根压静脉的近心端，手指轻弹或用酒精棉 球反复涂擦耳静脉，使血管扩张，针头沿血管刺入，见有血液回流接入真空采血管 前腔静脉采血：保定器让猪头仰起，露出右腋窝，针头从右侧向心脏方向刺入，回抽见有回血时，即把针心向外拉，使血液流入采血真空管 血清分离： 采血后针心后拉抽入少量空气，倾向放置，血液凝固前不能晃动以防止溶血，血液经过自然放置数小时，冬天可置37℃ 病原检测样品的采集 1、家禽喉拭子和泄殖腔拭子采集方法 取无菌棉签插入鸡喉咙内转动三圈或泄殖腔内转动三圈取出，插入含有1ml含青霉素、链霉素各3000单位的PH值为7.2的pb离心管中，减去漏出部分，盖紧瓶盖，做好标记 2、牛羊O-P液的采取方法： 先禁食12小时，助手保定牛，消毒碳杯，术者手从牛喉角后沿伸入口腔，抓住舌头，将碳杯送入咽喉，顺吞咽动作将采样杯来回抽动三次即可。 将O-P液移入容器或汉克式（Hanks）液中保存。 3、猪扁桃体采取技术 扁桃体采样器使用：把采样钩拉在扁桃体上，快速扣动板机即可 扁桃体采集：用开口器开口，可以看到突起的扁桃体，快速扣动板机取出扁桃体放离心管中 病死畜禽的解剖 与重大动物疫病检测中，结果准确与否，样品质量是关键，因此采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法，科学采样采样时注意隔离防护，隔离或防护服进出场要消毒，准备好采样所需的器具 家禽采样需要： 酒精棉、碘酒棉、5ml注射器、无菌棉签、塑料离心管、签字笔、记号笔、采样单等 牛羊采样还需：牛鼻钳、20ml注射器、采血真空管、采样杯、OP液保存容器等 猪采样还需：猪保定器、开口器、扁桃体采样器等 脏器的采取还需：解剖刀、齿锯、剪刀、手术刀、镊子、病料保存袋等 所有病原检测样品都需冷藏箱加冰块保存和运输 血清样品的采集 家畜采血方法： 雏鸡（禽）心脏采血 左手抓鸡，竖折，手持采血针，平