无内毒素质粒小提中量快速提取试剂盒.PDF

◆ 无内毒素质粒小提中量快速提取试剂盒 ◆ 目录号1210 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 EndoFree Plasmid Midi Kit 无内毒素质粒小提中量快速提取试剂盒 目录号：1210  适用范围： 适用于5- 15ml 中等规模无内毒素质粒制备（mind preparations ）  试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50 次(121001) 平衡液 室温 5ml RNaseA （10mg/ml） -20℃ 250µl 溶液P1 4℃ 25 ml 溶液P2 室温 25 ml 溶液N3 室温 25 ml 内毒素清除剂 -20℃ 10 ml 15 ml 漂洗液WB 室温 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 15ml 吸附柱AC 室温 50 个 收集管（2ml） 室温 50 个 本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。 内毒素清除剂常温运输，4 度可以保存一个月，长期保存放-20℃。 储存事项: 1. 第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A 加入溶液P1 后（终浓度100ug/ml） 置于2-8℃保存。如果溶液P1 中RNase A 失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1 中补加RNase A 即可。 - 1 - 2. 环境温度低时溶液P2 中SDS 可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分 钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。  产品介绍： 本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，通过独特的内毒素清除剂选择性结合 离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH 值状态下选择性地结合 溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、 高pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA 从硅基质膜上洗脱。  产品特点： 1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2. 独特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（10 EU/μg DNA ），细胞转染效果极 佳。也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、等各种分子生物学实验。  注意事项 1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒， 过 夜培养14-16个小时，5- 15ml 培养物可提取出15-70µg的纯净质粒。如果所提质粒 为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，同时按比例增加P1、 P2、N3 的用量，其它步骤相同。 3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为1相当于大约50μg/ml DNA 。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条 DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培 - 2 - 养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺 旋可以超过90% 。 4. 质粒DNA确切分子大小， 必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知 道